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[求助]如何避免小黑点
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我养的肿瘤细胞株，长得很快，可是有很多小黑点，少的时候贴在瓶壁上，多的时候会随着液体漂（自认为可以排除细菌污染，因为细胞生长迅速，形态也不错）。开始以为是血清的问题，后来复苏细胞，第二天换液发现底面很干净，可是传一代之后小黑点又出现了，而且越来越多。我觉得是我操作的问题，小黑点应该是细胞碎片。我养的细胞成团生长，所以我不让它长得过密，每次消化的时候希望消化过一点，就是要等到最密集的地方也稍稍出现空隙才终止消化（0.25%胰酶3--5分钟），这样可以比较容易打散，但至少也要吹打三四十下。大家帮我分析一下，是消化时间长了，还是吹打多了，还是长得太快代谢所致？怎样才能让黑点少点？
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最新回复
33号 (2012-9-09 14:01:20)
我也碰到相似的问题,但是我培养时,细胞培养液中的小黑点可以动,经高手指点认为是寄生虫,叫什么黑蛟虫.就你刚才所说的情况来看,不知道你的小黑点能不能动,如果不能动的话,可能为支原体
cj_mondy (2012-9-09 14:01:37)
tuuu2 (2012-9-09 14:02:05)
你可以换另一批血清看看还会不会出现这样的问题。
misswu61 (2012-9-09 14:02:27)
我的也发现有小黑点，对细胞生长有很大影响。有小黑点存在时细胞生长缓慢，一般1:2传代不到2天就能长满，但有小黑点时３天都长不满，细胞活力就不行了，好郁闷！
yes4 (2012-9-09 14:02:54)
以我们实验室的经验，血清的沉淀物有可能，但是很多情况下是絮状的沉淀或者是透明的小点，不太可能是黑色的小点。所谓的黑点最有 可能的就是死细胞分解的碎片，裂解的细胞碎片确实会影响细胞的生长，但是影响不并是想像的那么大，但是一旦出现黑点本身就说明你的细胞已经开始慢慢死亡（原因很多），所以这个时侯细胞的状态肯定不会好的。
rxcc33 (2012-9-09 14:03:15)
我曾经培养的悬浮细胞也出现这种情况，出现较多小黑点，换液没有用，不是污染，但细胞生长缓慢。换了一批血清也不行，细胞状态难以恢复，最后只有重新复苏一批。
所以我想如果你还有冻存的细胞株，就别再浪费时间了，重新做吧。
yysr238 (2012-9-09 14:03:31)
一旦有了小黑点就很难除去，我试了ＰＢＳ洗，换液，然后再传代还是有小黑点，同意sandy99 的看法，如果不想过多浪费时间的话唯有重新复苏再做了。
cj_mondy (2012-9-09 14:03:51)
谢谢大家的意见。有黑点的细胞确实不太好,虽然形状不错,生长也快,可是上流式测发现凋亡率超过了10%，说明黑点影响还是很大的，也许肉眼看不出来。我已经重新复苏了一管，可是很担心黑点会不会再出现，我需要注意些什么呢？血清已经换了一瓶，不过是一个地方买的。
大白菜 (2012-9-09 14:04:54)
支原体在培养液中不会动吗？
baidukk (2012-9-09 14:05:09)
呵呵,黑蛟虫.厉害,这都讲出来了!我也听说过.我养细胞时也出现类似情况.
有人说是L细菌.如果你传代时,密度过底,细胞就很难长出来.圆点就会越来越多.
jrwyyplt (2012-9-09 14:05:26)
我曾经养过内皮细胞,也是出现小黑点问题,最后趴在细胞上将细胞分解掉细胞死亡很快,估计是黑蛟虫.,
whitesheep (2012-9-09 14:05:43)
我也遇到了同样的问题,我养的是HepG2,开始的时候我认为是培养瓶的背景造成的,但是其他的细胞用同样的瓶,却没有这种现象,而且传代后密度高的要比密度低的黑点多,而且黑点是不动的.我也怀疑过是支原体.但是细胞生长速度正常.
我也试过重新复苏细胞,可是黑点依然在,为什么啊?急需解决,我都郁闷死了,
请高人指点,谢谢!
www.1 (2012-9-09 14:06:00)
KGZ564 (2012-9-09 14:06:51)
我也碰到小黑点，细胞复了一次又一次，还是有。昨天重新买的，看到还是有，就没动它，我想可能是血清析出物，想放放看看，若有问题，就是本来的细胞株有污染了。急呀！
wmp1234 (2012-9-09 14:07:08)
黑蛟虫的确很厉害。我养的脂肪细胞现在正被黑蛟虫趴在上面分解呢，谁能指点指点，如何避免和去除黑蛟虫。
Alice-wy
qqq111 (2012-9-09 14:07:38)
我的细胞也有这样的情况，但是有些细胞调整它的ph就可以改善一下。究竟是不是黑胶虫我觉得还是个问号?我个人认为还是细胞的培养环境影响最大。
bananapeople (2012-9-09 14:08:01)
对细胞生长影响很大,我奉劝有类似情况的朋友,在细胞状态好时,抓紧测指标,没有什么好办法,听说国外实验室也没办法.
one (2012-9-09 14:09:24)
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大侠能否描述一下，黑蛟虫是什么样的？我还没有见过，谢谢！
cj_mondy (2012-9-09 14:10:23)
可能是吹打有些过了。
我是第一次培养细胞，第一次有24孔中转到瓶中，加完培养液一看，整个瓶中没几个细胞，之后每次都吹打很长时间，细胞是吹打起来了，而且传过去的密度也挺大，可就是经常发现细胞贴壁不好，搞不清是吹打过度还是密度太大，或者是瓶盖拧得太紧的缘故，换液之后会好一些。给点指点吧，多谢！
hold住 (2012-9-09 14:11:03)
我感觉过渡消化对细胞很不利。可能导致死亡，死细胞慢慢分解，最终出现细胞碎片。消化时能保证所有细胞均脱落就可以了，不需太久。
为了防止细胞过密，可以多传几瓶或丢弃部分细胞
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