[求助]细胞的培养

最新回复

• xevin (2012-9-09 14:28:56)

  
  细胞的状态怎么样?
  可能是培养瓶的盖子拧得太紧了,把它稍微拧松一点试试.

• cocacola (2012-9-09 14:29:11)

  
  CO2的孵箱是不是出问题了？
  
  赶快看一看哦，细胞耐酸不耐碱的！
  
  再就是像楼上说的，瓶盖是不是太紧了？

• S6044 (2012-9-09 14:29:34)

  QUOTE:

  原帖由 cocacola 于 2012-9-9 14:29 发表
  
  CO2的孵箱是不是出问题了？
  
  赶快看一看哦，细胞耐酸不耐碱的！
  
  再就是像楼上说的，瓶盖是不是太紧了？

  瓶盖并没有太紧，变红不知道说明了什么问题呢？

• S6044 (2012-9-09 14:29:54)

  QUOTE:

  原帖由 xevin 于 2012-9-9 14:28 发表
  
  细胞的状态怎么样?
  可能是培养瓶的盖子拧得太紧了,把它稍微拧松一点试试.

  瓶盖并没有太紧，变红不知道说明了什么问题呢？细胞有一些但是个头很小，会不会是二氧化碳不足的问题

• xevin (2012-9-09 14:30:18)

  瓶盖并没有太紧，变红不知道说明了什么问题呢？细胞有一些但是个头很小，会不会是二氧化碳不足的问题
  
  ——————————————————————————————————————————
  
  是红色还是粉红？
  
  红色说明CO2正常，粉红是偏碱了，CO2少了！——培养液清亮吗？希望不是污染。

• S6044 (2012-9-09 14:30:59)

  是红色还是粉红？
  
  红色说明CO2正常，粉红是偏碱了，CO2少了！——培养液清亮吗？希望不是污染。
  
  ————————————————————————————————————————————————————————————————
  
  是红色，，培养液非常非常清亮，前几天培养的细胞也出现此现象，连续培养10天，都不用换培养液，培养液的颜色也不变化，一直都是红色，细胞也不长，当时认为是培养液出了问题，所以又配过了培养液，但现在的情况和上次的一样，我非常担心，又不知如何办。但是我的细胞养了快1个月了，二氧化碳钢瓶上的指针的读数一直没有变化（显示有很多），所以我不知道是不是二氧化碳出了问题，

• toy (2012-9-09 14:31:18)

  培养箱有没有显示CO2的状况?

• remenb (2012-9-09 14:31:45)

  
  有些冻存的细胞，复苏后长得很慢，贴壁非常慢，如果不是污染，也可排除PH的影响，那你只有耐心地等细胞贴壁了！（血清没问题吧？！）有人做细胞复苏，要等1个月才能贴壁，然后才会开始生长。

• S6044 (2012-9-09 14:32:07)

  培养箱有没有显示CO2的状况?
  
  ————————————————
  
  有，CO2的浓度显示数值为5

• S6044 (2012-9-09 14:33:33)

  有些冻存的细胞，复苏后长得很慢，贴壁非常慢，如果不是污染，也可排除PH的影响，那你只有耐心地等细胞贴壁了！（血清没问题吧？！）有人做细胞复苏，要等1个月才能贴壁，然后才会开始生长。
  
  ————————————————————————————————————————————————————————————————
  
  可排除血清问题，血清是去年8月份买的，买后封装冻存于冰箱中，在上学期培养细胞，情况一直不错。并且我得细胞是悬浮生长型的，照您的说法，耐心的等细胞生长，等待的过程需不需要添加培养液

• xevin (2012-9-09 14:34:06)

  并且我得细胞是悬浮生长型的，照你的说法，耐心的等细胞生长，等待的过程需不需要添加培养液
  
  ——————————————————————————————
  
  悬浮生长型的细胞更难养些，耐心等等，等一段时间再说
  
  期间还是要换培养液的，时间稍长一点再换。

• abc816 (2012-9-09 14:34:50)

  
  我觉得刚复苏的细胞才一天，有些生长或贴壁慢的细胞还不可能达到正常的生长状态，不会消耗太多营养，培养基不会很快便酸。还有，一般说培养基的颜色要么是指示中性，要么是酸性或碱性。很红的概念很是模糊！用枪取少量培养基滴到PH试纸就行了。
  对于常用的1640和DMEM培养基来说，DMEM有更好的酸性缓冲能力，就是说较耐酸，也就不易变酸。我的一个师姐曾遇到一个板的细胞中间孔和外周孔的生长状态差的很远，最后发现是培养箱的问题，虽然指示的是5！！！
  养细胞中的每日的细致观察很是重要。另外，细胞和细胞也不同，每个都有自己的脾气！！有些细胞要勤换液，不管酸碱，有些不然。我曾经无意把一肿瘤细胞放置一月，期间没有换液，细胞仍然存活，奇迹！！

• S6044 (2012-9-09 14:35:23)

  我觉得刚复苏的细胞才一天，有些生长或贴壁慢的细胞还不可能达到正常的生长状态，不会消耗太多营养，培养基不会很快便酸。还有，一般说培养基的颜色要么是指示中性，要么是酸性或碱性。很红的概念很是模糊！用枪取少量培养基滴到PH试纸就行了。
  对于常用的1640和DMEM培养基来说，DMEM有更好的酸性缓冲能力，就是说较耐酸，也就不易变酸。我的一个师姐曾遇到一个板的细胞中间孔和外周孔的生长状态差的很远，最后发现是培养箱的问题，虽然指示的是5！！！
  养细胞中的每日的细致观察很是重要。另外，细胞和细胞也不同，每个都有自己的脾气！！有些细胞要勤换液，不管酸碱，有些不然。我曾经无意把一肿瘤细胞放置一月，期间没有换液，细胞仍然存活，奇迹！！
  
  ———————————————————————————————————————
  
  想问问你师姐是如何从指示的是5中，判断出是培养箱出了问题，出的是什么问题

• ladyhuahua (2012-9-09 14:35:50)

  
  为什么不把细胞离心下来，换上新的培养基再观察观察呢？
  
  ————————————————————————————
  
  可排除血清问题，血清是去年8月份买的，买后封装冻存于冰箱中，在上学期培养细胞，情况一直不错。并且我得细胞是悬浮生长型的，照您的说法，耐心的等细胞生长，等待的过程需不需要添加培养液

• S6044 (2012-9-09 14:36:14)

  为什么不把细胞离心下来，换上新的培养基再观察观察呢？
  
  ——————————————————————
  
  细胞是刚刚解冻，并用新配置的培养液养

• xevin (2012-9-09 14:36:39)

  为什么不把细胞离心下来，换上新的培养基再观察观察呢？
  
  ————————————————————————————————————————————————
  
  刚刚复苏的细胞最好不要很频繁的更换培养液，给细胞一定的适应时间，也不要每天拿出来看许多次
  ——每次拿出孵箱，CO2的浓度都会改变，等你看完放回去，才会变正常，这样也不利于细胞生长。
  ——每天最多拿出来看一次，没有污染，培养液颜色正常，就可以了。
  ——不要总晃动培养瓶里的培养液，轻拿轻放。（对新复苏的细胞而言）

• 阿敏 (2012-9-09 14:37:01)

  
  请教各位大虾,2.2.15细胞如何消化?我养的这种细胞消化后不长,为什麽?

• xevin (2012-9-09 14:37:29)

  请教各位大虾,2.2.15细胞如何消化?我养的这种细胞消化后不长,为什麽?
  
  ————————————————————————————————————————————
  
  你说的这种细胞我没养过。
  消化一般都是用胰酶消化，0.1%或0.25%最常用。
  消化的时间长短对细胞很重要——短了消化不下来，长了细胞性状不好，或干脆死掉了。
  消化是的温度也很重要，冬天的时候如果不放到37度的地方，可能要慢很多。
  
  而细胞不长的原因除了与消化有关外，关键是培养液以及可能出现的污染。
  培养液的问题包括血清，PH值，以及孵箱的CO2浓度等。
  
  你可以先查查文献，这种细胞的生长性状是怎样的，然后再来找不长的原因是什么。