【求助】中药含药血清过不了滤膜,怎么办?

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• ending (2012-9-14 16:28:45)

  
  血清过0.22 um的滤膜后会损失许多有用的物质，也许会有你想要的。所以，取了老鼠的血清后是不用过滤的。只要你取血时用的工具都是灭过菌，并且操作过程也是无菌的，那么这样的血清直接可以用来做体外实验的，因为体内的血液里怎么可能会有菌呢。也不用加抗生素的。

• yueban-1147 (2012-9-14 16:29:18)

  
  我也同意楼上的意见，取血清一般都要求无菌，故不存在过滤除菌的技术要求。
  如果实验中无法保证无菌，一定要过滤除菌的话，可以先用0.45um滤膜过滤节除去大分子蛋白，再将过滤后的液体经0.22 um的滤膜除菌。

• remenb (2012-9-14 16:30:27)

  血清过0.22 um的滤膜后会损失许多有用的物质，也许会有你想要的。所以，取了老鼠的血清后是不用过滤的。只要你取血时用的工具都是灭过菌，并且操作过程也是无菌的，那么这样的血清直接可以用来做体外实验的，因为体内的血液里怎么可能会有菌呢。也不用加抗生素的。
  
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  我认为这个观点不正确，我们用过的进口的血清是经过0.1um的滤膜过滤的，固然过滤的时候会损失一些东西，甚至会破坏一些蛋白，但是只要实验是平行的，对照组之间是条件一致的，那么就是具有可比性的，
  体内的血液是可能会有菌的，而且可能会有别的病原微生物(比如支原体)，并且一旦污染，实验结果将受到很大的影响，那么实验的可比性会很差的，因此，我的建议是无菌取，但是还是要过滤，最好用进口的滤膜。不好过滤的话，可以用负压过滤啊，一般一个膜能滤100ml左右。

• ending (2012-9-14 16:31:21)

  我认为这个观点不正确，我们用过的进口的血清是经过0.1um的滤膜过滤的，固然过滤的时候会损失一些东西，甚至会破坏一些蛋白，但是只要实验是平行的，对照组之间是条件一致的，那么就是具有可比性的，
  体内的血液是可能会有菌的，而且可能会有别的病原微生物(比如支原体)，并且一旦污染，实验结果将受到很大的影响，那么实验的可比性会很差的，因此，我的建议是无菌取，但是还是要过滤，最好用进口的滤膜。不好过滤的话，可以用负压过滤啊，一般一个膜能滤100ml左右。
  
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  同意楼上观点，血清经0.22微米孔径的微孔滤膜后，对其中的活性成分的影响是不大的，况且在做实验时是需要设对照组的；除非所用的实验大鼠是SPF级大鼠，不然无法排除体内是否有微生物存在（当然，一般情况下血液里是无菌的。如果加抗生素不影响实验效果，完全可以用抗生素如青、链霉素预防细菌污染，谁也不能保证在实验操作中或在后续的培养中一点不会污染，特别是还培养一段时间的。
  血清中成分复杂，如果过滤膜困难，在不影响实验的情况下可以加生理盐水之类液体适当稀释一下再过滤，应该能够顺利通过0.22微米的微孔滤膜的。

• wu11998866 (2012-9-14 16:32:06)

  
  很有收获！！楼上各位的意见我都同意，说的都很好呀，可能主张要过滤的说法更严格一点。但是过滤会对中药处理后的血清产生什么样的影响呢？
  不知道楼主取血用的是什么方法，如果是用眼眶取血，再考虑到后面的离心等步骤，要保证完全无菌是不可能的，所以不过滤怕是不行吧。只是经过过滤后，不知道你感兴趣的成分会不会被损失掉？而且中药作用后，估计到底在血清里头产生了什么东西，你应该是不清楚的吧。谁知道过滤后会发生什么？所以能不过滤自然是最好的了。以上好象是矛盾的焦点。而至于血清中是否无菌的问题，对于一个免疫功能正常的大鼠，细菌和支原体、衣原体应该是没有的，但是有没有病毒就不能保证了。如果是长期在SPF级的动物房里繁殖的，这些微生物应该都不会有的。
  如果是用心脏穿刺取血，打开胸腔，穿刺心脏取血后，立即套上针帽。以后的可能污染的操作尽量在超净台做，应该是不会有什么微生物污染的，反正临床上对怀疑感染的病人的体液就是通过这个方法和操作，采的标本再送去培养的。关键是一旦用这样的未经过滤的血清培养成功，实验的结果更有说服力。还是那句话，能不过滤就尽量不要过滤吧。
  只是我一直奇怪，楼主的血清为什么会过不了0.22的滤膜呢？奇怪......分离血液中血清应该是2000转，15分钟呀，难道是这个问题没掌握好？还是奇怪......

• TNT (2012-9-14 16:32:24)

  
  看了各位的观点，正如楼上所言很有收获。本人正打算进行含药血清实验，关于使用含药血清实验，大多数观点还是支持滤过除菌的，但也有一些特殊的情况，比如楼上所言的不能通过滤膜以及血清样本太少等。后来一位前辈告诉我，他们做此类实验时也不过滤，而是进行紫外线照射。方法很简单：就是将血清加到合适的培养板中，放在超净台里紫外线照射30～60分钟，从来没有发生过污染。不过，我目前还没有亲自试试，是否真的可行，我觉得应该做个预实验看看。

• fei1226com (2012-9-14 16:33:51)

  谢谢大家，低温冷冻可以吗？

• 49888 (2012-9-14 16:34:20)

  
  个人觉得楼上群友说的进行紫外线照射方法可能不行，紫外线照射一般只能用于物体表面的杀菌，它的穿透力很差的，一张报纸都穿不过。
  体温冷冻肯定不行的，细胞都可以在低温下保存，微生物，那还不是照样活。

• tieshazhang (2012-9-14 16:35:50)

  
  说到无菌取，如果说严格无菌，摘眼球取血，镊子不能反复用吧，但没有十几把镊子可以换啊，再个取血用的一次性离心管都光口的，难免进点东西，还有取血时，接血时离心管得靠着老鼠眶下吧，普通饲养环境下，耗子身上也有不干净的东西吧？
  我用了3000转离心，15min，真出来不少，两只老鼠离出5ml血清，挺高兴的，现在过不了膜，嘴都起泡了，过膜时还浪费了2ml，心疼得直蹦~~~~

• qumm1985 (2012-9-14 16:37:00)

  说到无菌取，如果说严格无菌，摘眼球取血，镊子不能反复用吧，但没有十几把镊子可以换啊，再个取血用的一次性离心管都光口的，难免进点东西，还有取血时，接血时离心管得靠着老鼠眶下吧，普通饲养环境下，耗子身上也有不干净的东西吧？
  我用了3000转离心，15min，真出来不少，两只老鼠离出5ml血清，挺高兴的，现在过不了膜，嘴都起泡了，过膜时还浪费了2ml，心疼得直蹦~~~~
  
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  大鼠最好，采用无菌的腹主动脉取血，2只大鼠收获的血清含量应该不止5ml。另外，最好一次多制备一些血清，因为这个和药物不一样，不同批次的血清差别是非常大的。所以应该一次多准备几只大鼠，多制备一些血清，保证一个大实验用的血清是一样的，空白大鼠血清也如此。然后再过滤，浪费得会少一些；或者可以用以后相应的培养基适当稀释一下，然后再过滤，就不至于出现上述种种问题了。
  
  紫外消毒不可取，蛋白等等全变性了。

• cj_mondy (2012-9-14 16:37:25)

  
  谢谢大家,我把一组血清已经加到细胞上了,倒是没见到污染,就是细胞全飘起来了~~~~~

• 2541 (2012-9-14 16:37:57)

  谢谢大家,我把一组血清已经加到细胞上了,倒是没见到污染,就是细胞全飘起来了~~~~~
  
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  “细胞全飘起来了~~~~~”那可能也是染菌的表现呀...同情ing~
  
  我考虑试验设计应是：
  血清分装成需用量，避免反复冻融－>置－20C保存，取出后应一次用完—>试验时将血清加入培养液中－>0.22um膜除菌过滤—>如考虑血清粘在滤器上损失，可加入培养液冲洗滤器的步骤－>加有血清的培养液用于目的实验。

• DDD (2012-9-14 16:39:23)

  
  有专门用于过滤血清的一次性过滤器（进口），孔径为0.22um，效果比普通的滤膜要好多了，过滤二十多毫升没问题。