【求助】细胞之间的点点是不支原体或衣原体啊?


细胞近几次传代发现贴壁细胞之间有很多小黑点点,看的人发毛。但培养基是澄清的。
瓶子里养细胞是好的。但MTT,96孔板里有几个孔都被点点占据,细胞死光光,看的人心寒。



求救,是啥玩意啊

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  • fei1226com (2012-9-15 16:01:29)


    最好有照片看看,通常支原体镜下是看不到的
  • zsxan1990 (2012-9-15 16:03:28)


    支原体和衣原体是看不见的,你的培养基颜色比较清,可考虑是不是一些带的杂质或是瓶子不干净,如果对细胞生长没有影响应该没有问题,另外有可能真的是细菌 污染了,不过培养基暂时还没有变浑浊。如果是细菌污染,镜下看小黑点会动的
  • 3648755 (2012-9-15 16:05:20)

    那些小點如果不是細菌, 便只是沉澱物而已...
    支原体和衣原体這種東西不是看不到,
    而是必須先做螢光染色, 去染細胞核....
    如果沒污染, 只會見到細胞那巨大的細胞核,
    然而, 若是污染了, 你將會見到細胞的細胞核周圍佈滿微小的亮點,
    有如點點繁星...那就是支原体或衣原体了...-_-a
  • redbutterfly (2012-9-15 16:05:43)


    楼上战友已经说了,支原体和衣原体是看不见的,细胞也不会死那么快,只是生长缓慢。
    如果培养基变黄,考虑细菌污染,如果培养也没有变黄或变得较慢,那些小点点是否是霉菌孢子?
  • dog002 (2012-9-15 16:06:23)


    不可能是霉菌孢子...
    就算有, 哪會多到這地步?
  • mimili_901 (2012-9-15 16:06:53)

    最可能的就是常说的黑焦虫污染,我也见到过类似情况。
  • dotaaa (2012-9-15 16:07:14)


    请问,应该如何做荧光染色,谢谢
  • bs4665 (2012-9-15 16:07:39)


    我沒做過, 我只看過別人做...
    藥品是DAPI (D8417, Sigma),
    其餘的, 查查細胞培養的書應該會有吧?
  • qqq111 (2012-9-15 16:08:05)

    细胞近几次传代发现贴壁细胞之间有很多小黑点点,看的人发毛。但培养基是澄清的。
    瓶子里养细胞是好的。但MTT,96孔板里有几个孔都被点点占据,细胞死光光,看的人心寒。



    求救,是啥玩意啊

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    我在做细胞实验的时候也遇到过类似的问题:而且培养瓶中的细胞刚传代后小黑点很少,甚至是没有,但是第二天也有了。我分析:
    1‘细菌的可能性有的,因为生长的比较快呀;如果你的培养基中没有加抗生素那就可能性大了!
    2’酵母不能排除,因为培养基颜色没有变呀,建议调整显微镜的焦距,看看培养基的上层是否飘着些透亮的小颗粒,个头明显小于细胞,但是有比细菌的个头大的多的酵母 ?
    3‘我的处理方法就是重配培养基,加上青霉素+链霉素,另外重新复苏细胞,如果细胞不是很珍贵,而且冻存比较多的话
    4’要排除其他杂质/代谢物的可能的话,你用个MTT法,看看颜色的变化就知道了,如果是细菌或者酵母的话,颜色会特别深的。
  • qqq111 (2012-9-15 16:08:53)


    更正一下:“但是有比细菌的个头大的多的酵母 ?”应该是“但是比细菌的个头大的多的酵母?”,不知怎么搞的,多了一个“有”字,搞的有点不知所云了
  • junhun (2012-9-15 16:09:21)


    应该是园子常说的黑焦虫,但是这个问题至今没有哪个战友讲的清楚。建议你早点放弃,重新复苏,这样会更省时间的。
  • kuaizige (2012-9-15 16:09:38)


    黑焦虫,绝对的黑焦虫!