【求助】关于293细胞

最新回复

• xueyouzhang (2012-9-15 16:18:05)

  
  我是用293细胞包装逆转录病毒的,不知你在作什么,我的经验是把细胞冻起来,用的时候复苏就行了,同时细胞复苏后传几瓶再冻一批,就这样一直做就行了,不用一直养着.

• jujuba (2012-9-15 16:18:26)

  
  我是用它来包装AAV的，因为所需细胞量很多，所以一直养着，想多养几瓶，可越养越差，知道293不能传太多代，但我们这儿冻存细胞是在液氮中，复苏所需时间长而且很难存活。好烦人呀！该如何是好呢？还想请教一下，293消化时究竟该怎么处理，用什么消化液，该吹多少次呢，如何判断是成单细胞状态？园子里有很多不同版本的意见，都不知该选哪种好了！清高手们不吝赐教！！！感激不尽！

• jujuba (2012-9-15 16:18:59)

  
  对了，有谁知道STRATAGENE公司的AAV-293细胞是不是293T细胞？

• HP007 (2012-9-15 16:19:19)

  
  还可以降低生长液的血清浓度，用维持液马

• fei1226com (2012-9-15 16:19:38)

  
  既然已经是建立的细胞株，性状应当是稳定的，不用考虑其生长代数。
  
  况且，从上个世纪 70年代，到现在，HEK-293 细胞不知长了多少代；细部所卖给我们细胞时，根本就说不清细胞在他们手中长了多少代；细胞在我们手中培养，在每次传代时，我们说不清细胞已经进行多少次二分裂生长。
  
  既然如此，就不必考虑传代次数了嘛！但良好的生长状态很重要！

• kuaizige (2012-9-15 16:19:57)

  
  我看过一个载体的说明书，它说不宜超过30代，建议及早保种。

• 园丁## (2012-9-15 16:20:22)

  293细胞生长速度很快，但是它的传代次数又不宜太多，
  
  那么怎么办呢？ 请高手指点。
  
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  扩增后，大量分批冻存，保证以后有足够的细胞使用。

• pengke1983 (2012-9-15 16:20:41)

  
  293细胞传代次数不宜太多，最好不超过30代。代数太多后，细胞形态会发生变化，性状会发生变异。故应尽早大量冻存，等需要时再复苏即可。

• yhz1973 (2012-9-15 16:20:59)

  
  我也碰到一些问题，在复苏AAV-293细胞时，我用Gibco血清和DMEM培养在一次塑料瓶里的，但细胞不贴壁。不知为何？

• cj_mondy (2012-9-15 16:21:44)

  
  293细胞生长速度很快，但是它的传代次数又不宜太多，
  
  那么怎么办呢？ 请高手指点。
  
  我觉得就算是传代次数真的如你所说，也不是没有办法。首先，同意“扩增后，大量分批冻存”的办法，可以不用冻在液氮中的，直接放在－80ºC的低温冰箱中就可以了，取用方便，据我所知，上海肿瘤研究所细胞房中的很多细胞，如果经常用的话，就放在－80ºC的，放个半年一点问题也没有，293我也养过，这样放肯定是没有问题的。
  另外，建议你的培养瓶可以换换，现在有250ML的培养瓶呀，一瓶细胞数量绝对够多！！如果你嫌贵的话，就用培养皿吧，10CM直径的好用还实惠，而且对于293这种容易消化的细胞系而言，用培养皿操作起来够方便！
  还有，实在是增殖快的话，你可以在传代的时候，每瓶少传一点呀，它还能快起来吗？
  欢迎批评指正，谢谢！！！

• milkdog (2012-9-15 16:22:00)

  
  把培养成分调整一下，照Invitrogen公司的说明书作。我用的从国外买的293A细胞，传代较好。

• greenbee (2012-9-15 16:22:19)

  
  我是用hek293 來產生adenovirus 的, 第一管是從atcc 買的, 買回來時是passage 1 回來後第一件事是將他amplification. 大概凍存了40 vial passage 4的 hek293, 以後就用passage 4 的 cell 來用, 用到passage 12左右就不用, 因到passage 12 後會開始differentiation, 會變得長長的, 而且貼得會很不好, 這樣一次產生的virus 已經足夠我一年使用, 還有hek 293 對medium 的溫度很敏感, medium最好要回溫到37 度才使用否則細胞會貼得不好及存活率很低