【求助】我的细胞是污染了吗？

最新回复

• wood533 (2012-9-16 10:18:57)

  
  我的细胞正常吗？

  
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• yychen (2012-9-16 10:19:29)

  
  1.如果细胞生长良好，根据我的经验，一般不会污染。
  2.“上清中布满了丝状物如螺旋体样，还有好多的黑色渣子”，不知是肉眼还是镜下？如果是镜下我建议用擦镜纸擦拭一下显微镜镜片，看是不是镜片上的脏东西。
  3.培养瓶盖过火消毒时注意时间不能太常；吸过培养用液和小牛血清的吸管不能再过火；吸管上安装的吸耳球是否老化等都有可能使培养用液中出现黑渣。
  4.如果以上方法还不能解决问题，还需细胞培养老手指点迷津。

• abc816 (2012-9-16 10:20:39)

  
  从以上两图推断：细胞很可能没有污染．丝状物和黑色渣子很可能是酒精灯燃烧的灰尘或包瓶口的白纸烧后的黑色渣子或瓶盖上掉下的东西．每次换液前，用消毒的PBS冲洗一到两片，并对因加以避免．当然，如果丝状物和黑色渣子还是继续增多的，而细胞状态越来越差，那就的好好查一下原因了．

• jrwyyplt (2012-9-16 10:20:56)

  
  我也遇到过类似的问题：
  感觉不是污染造成的，但一时又除不净，曾经怀疑是酶液/培养液的问题；每次换液或者消化之前都用D-hank's液洗几次（后来图省事，直接用生理盐水：）），明显转好。
  个人感觉，应该是操作中的不严格或者不规范引起，烟海沉浮 站友提到的塞子、吸管等过火的问题，倒是值得注意！
  确实学到不少东西，希望能够继续讨论下去~

• wood533 (2012-9-16 10:21:12)

  谢谢各位战友的回复！
  不是塞子、吸管、过火的问题，我们实验室用的是加样枪，不用橡皮吸头，这是200X的显微镜下的照片，渣子越来越多，但是细胞也在生长，好像相安无事。但是实在是不敢相信细胞没有问题。
  大家看我的第二张片子，细胞膜是不是有点破？烂糟糟的感觉。细胞内的粗颗粒很多。

• guagua (2012-9-16 10:22:42)

  
  如果颗粒太多，黑点太多，就有可能是支原体污染了，只是还在初期，并没有抑制到细胞生长。

• ROSE李 (2012-9-16 10:22:58)

  1.可能是支原体污染，但又不太像，因为支原体污染应该在光镜下看到均匀分布的很小的小黑点，密密麻麻的。要看细胞是不是比以前生长慢了，我上次的细胞就被支原体污染了，害整箱细胞都得重换。
  2.也有可能是细胞死亡比较多，是一些细胞碎片，用用三楼的方法。
  3.要不重新复苏一批细胞，看是否还有类似问题。
  4.我还看到细胞浮起（细胞成圆形）的比较多，是不是死亡较多，贴壁的细胞就几个
  5.抗生素有没污染。

• zwsyrt (2012-9-16 10:23:34)

  
  我觉得应该是死细胞太多造成

• TNT (2012-9-16 10:23:50)

  
  我的细胞也有出现跟顶楼一样的状态，根据个人长期观察，那不是酒精灯燃烧的火焰渣，到象是有生命物质繁衍的场所，当然，它似乎仅仅是影响观察，并没有对细胞的生长造成多大的威胁，两者和平相处，相安无事？难道真的如neogenesis 战友所言，为支原体早期反应？关注中ing......

• loli (2012-9-16 10:24:19)

  
  我也遇到过类似的问题：
  据我个人经验可能是细胞培养环境改变，建议你最后查一下HK－2的培养条件，例如培养液是RMPI1640还是DMEM，以及血清是小牛血清还是胎牛血清，以及是否需要加入其它的的试剂？