【求助】请教血清的质量问题！

最新回复

• jujuba (2012-10-05 17:25:19)

  
  hyclone血清不灭活也行，可能灭活太久了。10毫摩尔的hepes缓冲能力很弱，不如不加（至少应该到20毫摩尔）。另外加了hepes就应当减少碳酸氢钠的量，否则会增加渗透压。

• is2011 (2012-10-05 17:26:01)

  
  楼上的学长：那你觉得每升1640加了10 毫摩尔（约2.2.633克）的hepes和2克的碳酸氢钠会影响渗透压吗？不知我的培养基（渗透压或血清的问题）会不会足以影响了我的细胞生长状态？

• chuntian1983 (2012-10-05 17:27:01)

  从这些方面考虑一下：
  1 血清灭活太久，基本没什么作用了，恐怕这是主要原因。血清灭活的温度要求很严格，首先要找一瓶体积相同的水冻在血清储存的温度，比如-80度。（以前我们有一瓶水长期冻在-80）完全冻住后，也就是和你要解冻的血清保持在同一状态，虽然水和血清不能相比，但这个影响并不大。将血清放于4度解冻，水同样。然后进行下面的操作：首先将水浴锅调到56度，然后放入血清和水，将水的瓶盖拧松，插入温度计，等温度上升到56度，开始计时，灭活半小时，然后取出待冷却至室温后再进行分装。你多灭活一个小时，血清已经失效了。不过现在我们用的血清都不灭活了，除非特殊的实验，培养一般的细胞是不会激发补体作用途径的，所以灭活就失去了意义。
  因此改进的当务之急是先把血清换掉，别人的细胞养的好，用的不是你长时间灭活的血清吧？！
  2 配1640时，你没加糖吗？还是买来的粉剂里已经含糖？添加的剂量最好按说明书来。1640用碳酸轻钠做缓冲，一般不需要hepes,除非你们是常规添加。
  3 从你的问题来看，可以排除培养环境的影响。

• is2011 (2012-10-05 17:27:31)

  
  谢谢！我们的1640是GIBCO的，上面要没写加糖。至于HEPES我觉得还是加了好些，可以稳定PH值。我们这有的实验室加3.5克/升呢。不过一直以来我都没怀疑到血清的问题主要是考虑到在两个星期内细胞还是会长得很好的。现在看来血清有问题的可能性大些，因为好像别的实在没什么可怀疑的了。我打算明天换国产胎牛血清试试。

• loli (2012-10-05 17:28:06)

  
  1640里都是含糖的，根本不需要再加了，比较高档的培养基如GIBCO和SIGMA的都不需要加。

• kswl870 (2012-10-05 17:28:35)

  
  1640有含糖的和不含糖的，含糖的是2000mg/L，当然不用再加糖；另外还有一种无糖1640（Sigma），可以根据需要加糖。

• fei1226com (2012-10-05 17:28:55)

  
  问一个很菜的问题:
  1640中是不是一定要加Hepes吗？还有加不加Hepes跟含不含Co2的培养箱有没有关系？

• wood533 (2012-10-05 17:29:29)

  QUOTE:

  原帖由 fei1226com 于 2012-10-5 17:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  问一个很菜的问题:
  1640中是不是一定要加Hepes吗？还有加不加Hepes跟含不含Co2的培养箱有没有关系？

  
  我也想问问，刚刚发现过滤分装好了的1640里，忘了加HEPES了，怎么办呀？大家都尝过过滤除菌的苦，我可不想再来一次呀！：（
  我养的是肿瘤细胞，生长很好，可以不加HEPES吗？

• vcve (2012-10-05 17:29:50)

  
  我们实验室使用1640时从来不加HEPES，使用起来没有问题。

• greenbee (2012-10-05 17:30:45)

  
  hepes的作用只是稳定PH值罢了，只要确保你的培养基的PH在合适的范围就可以不加。如果你现在要加的话，也可以单独滤点HEPES加进去，使培养基的HEPES的浓度在10毫摩尔每升。（也有的实验室加更高浓度）。

• ritou1985 (2012-10-05 17:49:58)

  我们实验室使用1640时从来不加HEPES，使用起来没有问题。
  
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  真的吗？
  昨天分装完1640后，曾留了一小瓶青霉素瓶的，放CO2孵箱里，观察培养基处理过程中有无污染，结果发现，虽然还是澄清的，但颜色变成橙色了，可能还是没有HEPES的原因。如果说细胞可以稍耐受碱，而不耐酸的话，不加HEPES还是不行吧？
  你实验室的1640是本来就含HEPES的吧？

• langlang (2012-10-05 17:50:15)

  
  1640本身含的pH缓冲剂较少，所以在培养一些对pH要求较严的细胞的时候，最好加一些HEPES，我培养胆囊上皮细胞的时候，就加了HEPES，但NaHCO3就必须适当增加（HEPES是偏酸的），我一般是，加了HEPES以后，用NaHCO3把pH调回来

• newway (2012-10-05 17:50:34)

  
  Hepes一般不需要加，但培养基放久了PH会发生变化，这是使用前最好能用高浓度的HEPES（我一般用100mM）调一下PH还是很有用的，毕竟pH偏碱会延长细胞帖壁的时间。

• S6044 (2012-10-05 17:50:51)

  
  可以将小牛血清的量加到20%试试。

• october7 (2012-10-05 17:51:12)

  
  Hepes是起缓冲作用的，效果比NaHCO3要强，如果培养生长很快的细胞还是用含有Hepes的比较好。
  可以买到含Hepes的1640培养基，很方便只要过滤好就可以用了。

• ququer787 (2012-10-05 17:51:44)

  这学期，我一直用的是hyclone新生牛血清，但细胞总长不好，过两个星期就死，又没发现污染。培养箱内别人养的细胞都很好，我们的1640是gibco的，内加了2克碳酸氢钠，10毫摩尔的hepes，1毫摩尔的丙酮酸钠，无菌试验好的。配了好几次，但就是养不好细胞。不知会不会是血清不好呢，我们的血清在灭活的时候不小心多灭活了一个小时！另外，hepes如果稍多了一点（比如说该加10克加了9克）但ph值还是正常的(7.2) ，会不会有影响呢？？这个细胞的问题已困扰我们长达3个月，我快被逼疯了！
  
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  应该在配制1640时加一些葡萄糖！