【求助】细胞生长极为缓慢

最新回复

• gogo (2012-10-07 19:17:56)

  QUOTE:

  原帖由 mysmdbl 于 2012-10-7 19:17 发表
  
  养HeLa细胞为转染用,
  可是复苏都一个月了,一共才提过3次RNA
  基本一个星期才长满一瓶
  用的1640培养基,15%血清,都是GIBCO的
  明明都很干净,可是加了细胞半天后就不干净了,有很小的细末样东西.
  细胞状态不好,里面好象一 ...

  目前，我也在养Hela细胞。我用的是高糖DMEM＋10%胎牛血清（Gibco和四季青），长的很旺盛。复苏后4-5天必须传代，我按1:4传。
  
  不知道你的细胞怎么回事，考虑是否是培养基的问题还是你的细胞传代太多影响生长。建议换一下培养基！仅供参考！！
  “很小的细末样东西” 我认为可能是细胞碎片，由于分子运动存在，还可以让“很小的细末样东西”运动，但不是污染问题。至于是不是“黑胶虫”各家看法不一。不过一般不会影响细胞生长。
  Hela细胞一般很好养的！！
  一家之言！！

• skytree (2012-10-07 19:18:23)

  很有可能是污染了，而且可能是冻存的细胞源就有问题，我也碰到过这种情况，到别的实验室去要一瓶状态好的吧。

• mysmdbl (2012-10-07 19:18:47)

  
  关键是他们没有养HELA的了
  都是乳腺癌,鼻咽癌,神经类的
  
  再换培养基的话还得捣腾好久
  实在是怕了
  为细胞已经拖了快一个月了

• xyw5 (2012-10-07 19:19:12)

  
  细胞状态不好,里面的颗粒样东西在倒置显微镜下是静止的,但高速摄影确发现其运动剧烈!应该是污染!

• xyw5 (2012-10-07 19:19:33)

  "很小的细末样东西” 我认为可能是细胞碎片，由于分子运动存在，还可以让“很小的细末样东西”运动，但不是污染问题。至于是不是“黑胶虫”各家看法不一。不过一般不会影响细胞生长。"我不苟同.不会是分子运动!多了就影响细胞生长

• lagua123 (2012-10-07 19:20:20)

  你们实验室有没有人同时在做酵母表达之类的实验，
  要知道，有时候酵母是无处不在的，它极容易污染
  其他的细胞！

• BUK (2012-10-07 19:20:37)

  
  不同意没有污染的说法.如上所述,培养条件是没有问题的,正常的生长旺盛的细胞是不会有很多细胞碎片的,背景应该很干净,细胞轮廓清晰,生长速度较快,2到3天就要传代,若有很多细小碎片,液体不混浊,而且生长很缓慢的话,最大可能是被支原体污染.
  不用犹豫,弃之.

• 园丁## (2012-10-07 19:21:02)

  支原体和黑胶虫的可能性最大，gibco的血清有灭活的和未灭活的，虽然可能有布朗运动的颗粒，但一般不会影响生长。而支原体和黑胶虫就不是这样，支原体过多细胞生长即为缓慢，甚至会脱落成团，黑胶虫则会造成细胞融解，死亡。如果是这两种情况的话还是最好更换细胞。hela是比较好养的细胞，血清10％即可。

• kulee (2012-10-07 19:21:25)

  
  考虑支原体污染，Hela细胞很容易得到，重新养。我也遇到类似情况，细胞颗粒多，有杂质，一天得一换液。

• qumm1985 (2012-10-07 19:21:45)

  
  上述几位说得都有道理，不妨做下步实验：
  1 用Gibco培养基不加细胞培养1天，显微镜下观察有没有污染。
  2 重新离心细胞。
  3 加入高浓度血清培养液
  4 换血清和培养基。

• 小鱼鱼 (2012-10-07 19:22:17)

  血清量可提到20%。也可能是支原体污染。正常情况下Hela细胞的生长是很快的！

• ritou1985 (2012-10-07 19:22:46)

  肯定有污染。扔掉。

• yes4 (2012-10-07 19:23:13)

  
  我觉得是支原体污染，建议做一支原体检测，如果PASSIVE，细胞用PLASMOCIN处理。