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【求助】求助 MTT 法
【求助】求助 MTT 法
在下，很想听听各位战友在MTT方面的心得体会或着你们做MTT法的方法等等。
先请看看我在MTT时碰到的问题：
我的第二次 MTT实验。
在加DMSO之前，镜下可见MTT结晶密度与药物浓度基本呈一线性关系。
但去除上清液后，加DMSO 200 微升， 震荡溶解，测OD值，确发现没能表现出线性关系！
想来想去，可能是我去除上清液的时候，各孔残留的量不同吧。
多谢，各位百忙之中 ，给予的帮助
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最新回复
star#room (2012-10-07 19:24:35)
可能是你在吸去DMSO的不小心把一些MTT结晶也吸走了，
所以这个操作中要小心。
细胞最好是贴壁较好的，这样吸走MTT结晶的机会也会少一些！
feima+ (2012-10-07 19:24:57)
我吸的时候，各孔留的上清液不均一，是不是对实验有影响？？
主任平时吸除上清时，留多少液体在96孔内？？？
我听说有实验室，他们不吸除上清，直接加DMSO。可以吗？
乌贼老弟 (2012-10-07 19:25:23)
QUOTE:
吸上清液时一定要各孔均一，否则对结果肯定有影响。不吸除上清直接加DMSO－－避免了吸上清液时的实验误差，是可取的；
但是要注意，只有您的细胞量较大时，才可用。
如果细胞量少，还是不用为好，因为这时的OD值会很小！
IAM007 (2012-10-07 19:25:47)
每组设3孔对照，实验重复3次，细胞培养到一定时间后，置于含摔板机的离心机上离心，500 rpm/min，10min，弃上清，加入MTT(5 mg/ ml)，20μl/孔，37℃、5％CO2培养箱孵育4 h，去上清加入DMSO，100μl/孔，充分反应30 min，置于酶联免疫检测仪测吸光度值，波长为570 nm。三孔对照，实验重复三次。
加入DMSO 30min后从颜色上可以看出是否有区别。
BOSS2011 (2012-10-07 19:26:07)
盼盼 (2012-10-07 19:26:28)
我的办法是：把上清用加样枪定量吸出约2/3出来，，然后补加相同体积的洗脱液，那么浓度就可以相对保持平衡，也不容易吸走底部的结晶或细胞。吸出上清也用一个旧的96孔板装在相同的位置，也测定一下吸光度，如果有异常增高，而对应孔相对偏低，可以考虑是后期操作的问题，而排除增殖异常。
dog002 (2012-10-07 19:26:51)
相关疾病：
肝癌
为什么不试试mts法呢?好处是显而易见的:加入mts就可以显色,不用忙着甩啊吸啊的.ＭＴＴ法因其产物为难溶的结晶而需要特殊溶解,而ＭＴＳ的还原产物为可溶性的,其产物颜色较深,吸光度变异范围大,可提高灵敏度,且还原产物稳定,室温可放置18ｈ。因而ＭＴＳ法用于检测肝癌细胞药物敏感性更简便、准确。
why not?何必舍近求远?
qianqin1977 (2012-10-07 19:27:31)
zhezhe (2012-10-07 19:27:53)
feima+ (2012-10-07 19:28:16)
各位大侠 新问题：
镜下看，各药物浓度组之间形成的结晶有差异，可我的实验数据显示组间无差异！
问题出在哪里了？？
急！
恳请各位的指教。多谢。
乌贼老弟 (2012-10-07 19:28:39)
QUOTE:
首先不要着急，这是没有用，何不如静下心来好好总结一下！上面的几位朋友已经介绍自己各自的经验，很好。如果您的实验操作没有什么问题的话，那么就应该有一定的结果。
您设正常对照组了吧？
MTT的值我认为还是用实验组和正常对照组之比的百分数好一些。
feima+ (2012-10-07 19:29:01)
我设立了正常对照组
各药物浓度处理组与正常对照组有显著差异
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