【求助】about HepG-2

最新回复

• standbyme (2012-10-10 16:31:40)

  
  相关疾病：
  肿瘤
  可是大家还是可以谈谈养HepG2的一些经验啊！
  按理说肿瘤细胞应该很好养，细胞都是疯长的，可我的HepG2却长得很慢，5天左右才能长满一瓶（25平方厘米，75立方厘米），并且我的传代比例也小得可怜，2瓶变3瓶都有点勉强，更别说什么1：3、1：4的传代比例了！有时候一瓶长得满满的细胞经我消化吹打下来后，一计数，才10的5次方！没办法，我只好补足培养液把它们留在原瓶里继续培养－－您说这不是折腾吗！
  我的HepG2细胞很难吹打成单细胞，总是4、5个抱在一起，所以，也不知是我消化过头了还是吹打得太厉害了，反正每次传完代后，总有好些碎屑屑在里面（感觉像细胞碎片），可是即使是这样，细胞仍旧成团，像消化得不充分一样！由于有碎屑屑在里面，因此我几乎是天天换液，并且每次换液前细胞都用PBS漂洗2遍，可细胞依旧长得不快！我想，我的接种密度也不低啊，不该出现这种情况啊！真是闹不明白！
  我养细胞也有些时候了，别的细胞都长得白白胖胖的，就这株细胞长得慢！我也不知道我哪儿出错了，还望各位大侠与高人指点一二，万分感激！

• 二丫头466 (2012-10-10 16:33:02)

  
  我养过此种细胞，细胞长得非常快，一传二的话第二天就可以长满，而且这种细胞贴壁不是太稳，不需要用胰酶，直接吹打就可以传代。估计你的细胞长得不好的原因可能是有支原体污染，还是换株细胞吧。这个细胞在上海有卖，不贵，不要邮寄的话只要200多块钱吧！不要为了这点小钱耽误你的时间！

• zhenxin (2012-10-10 16:34:04)

  培养液：DMEM
  10%小牛血清(成都哈里)
  HEPES:10mmol/L
  GLUTAMINE:4mmol/L(注意,比其他细胞用量高一倍)
  NaHCO3: 3.7g/L
  
  若还不行,建议换细胞株
  若在重庆,我可以帮你

• zhenxin (2012-10-10 16:36:58)

  培养液：DMEM/MEM
  不知道怎么写成那样,呵呵

• zhenxin (2012-10-10 16:38:47)

  
  是dMEM/MEM
  唉

• gemei0115 (2012-10-10 16:39:13)

  
  我也养HepG2，情况和你很相似，正郁闷呢，如果真是衣原体感染就麻烦了，其他细胞也要感染了

• standbyme (2012-10-10 16:39:36)

  
  非常感谢各位的答复！谢谢！谢谢！真的十分感谢！！！
  支原体污染？Maybe！可我同时养了4、5种细胞，别的细胞都长的很好啊，为什么就HepG2不长呢？！
  我的细胞好像贴壁很牢，因为每次消化吹打下来细胞总喜欢4、5个抱成团，像消化不完全一样，可一计数，细胞的数目少得让人傻眼，才10的5次方！难道真的不需用胰酶消化？
  我用的是Gibco的1640培养，不知这个会不会有影响？！
  再次感谢大家的帮助！！！

• DDD (2012-10-10 16:39:58)

  
  我也在养HepG2,用的是DMEM，它对培养液要求一点也不高，长得特别快。建议你还是换一株细胞吧，这个细胞长得慢肯定有问题。

• 园丁## (2012-10-10 16:40:30)

  就象楼上群友所述，换换培养液试试！

• zhenxin (2012-10-10 16:40:56)

  还有
  如果细胞抱成团,传代时,细胞悬液先放置5min,然后取上面部分悬液传代,下面部分弃掉,或许可以改变成团现象
  血清可以稍微提高一下

• HPLC使者 (2012-10-10 16:44:04)

  
  HepG-2对培基的要求不高，我试过DMEM和1640，对生长影响不大。你的细胞肯定是要换的，但我帮不了你，抱歉！

• ladyhuahua (2012-10-10 16:44:23)

  
  1640培养液应该没有问题的
  你可以加大FCS浓度至20-30%，或许有用，我养过这种细胞
  情况和你相似
  我认为是细胞传代太久的原因
  如果没有条件重新买的话，加大FCS浓度
  应该能满足你的要求
  就是长的满一点

• ladyhuahua (2012-10-10 16:44:47)

  
  我觉得NaHCO3应该为 2g/L

• misswu61 (2012-10-10 16:47:28)

  我觉得NaHCO3应该为 2g/L
  
  ————————————————————-
  
  如果NAHCO3用2g/L,则需用NAOH 调节PH

• standbyme (2012-10-10 16:49:31)

  
  非常感谢大家的帮忙！
  由于该细胞我一直都是用1640养的，并且以前长得很好，因此可能不是培养基的问题；
  也许正如群友所述，我的细胞传代太久了。该细胞我拿过来自己养的时候是今年暑假，给我细胞的那位师兄他自己的实验做完了，正准备冻存，我通过种种关系向他讨了一瓶，因此也不知是第几代了。从7、8月份到现在，我一直在养着该细胞，期间并未冻存过，算算都快大半年了，细胞是不是真的传代太久了？－－我试着加大血清看看。
  谢谢各位！

• shenkunjie (2012-10-10 16:49:59)

  
  试加用氨基酸，曾经有一位朋友的HepG-2长的也不好，查到ATCC，根据建议加氨基酸，效果很好。