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有没有哪位战友培养过支持细胞?我培养的细胞不知道怎么回事，总是在培养24小时以后，改为无血清培养基培养，换液以后不到24小时就会发现有污染。我的细胞是原代培养的细胞，很难培养。用培养瓶做过几次，只有一次是成功的。可是我改为培养板，连12小时都不能渡过。我也分析过，我觉得我在操作的时候已经很注意无菌操作了。我的细胞对于培养基的PH升高特别敏感，每次换液之前我都要重新调PH值，而别人培养基可以用1个多月。真是郁闷。
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最新回复
nn255 (2012-10-19 15:32:54)
1。有污染，还是无菌操作不过关，可以向有经验的老师请教，也可考虑原代培养加双抗，改为无血清培养基培养时，不用双抗。
2。培养板更易贴壁，要用一次性使用的，进口的，因为老外的东东做了处理。
3。有没有加HEPES，具有较强缓冲作用，HEPES加了后pH值变化很小。
remenb (2012-10-19 15:34:14)
1.HEPES我加了。
2.双抗我也加了。
3.无菌方面我觉得我已经很严格了。
4.培养板我曾经用过一次性的，可是还是一样。
nn255 (2012-10-19 15:34:55)
1有污染，当然无菌操作不过关
2原代培养的细胞培养24小时，不能一下子适应外界的环境，常需3天以上，在无血清培养基培养。
3培养液配制的pH值是多？
4培养液的保存，冻融都有pH值影响
5你还需要摸索条件，首先解决无菌操作，可以看别人正规操作
remenb (2012-10-19 15:35:15)
PH值肯定在正常范围内的，这个我很注意的。我知道细胞对此很敏感，尤其是我的细胞。所以每次我都用过滤过的HCL调。
铜雀 (2012-10-19 15:36:04)
什么细胞对PH要求这么高？
还是注意原代操作，如果能排除培养液污染的话！
wu11998866 (2012-10-19 15:38:01)
PH值肯定在正常范围内的，这个我很注意的。我知道细胞对此很敏感，尤其是我的细胞。所以每次我都用过滤过的HCL调。
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无菌操作中有许多小的动作都是要注意的，
有时候自己认为作的比较仔细，但是往往是这些动作不注意就会造成污染！
remenb (2012-10-19 15:38:29)
还是注意原代操作，如果能排除培养液污染的话！
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是睾丸的支持细胞，非常娇贵。
真的培养起来好难
remenb (2012-10-19 15:39:00)
有时候自己认为作的比较仔细，但是往往是这些动作不注意就会造成污染！
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是的，我 看了你发的帖子，受益匪浅。有些问题我是疏忽了。以后多加注意。
idea2011 (2012-10-19 15:41:54)
不知楼上所说的污染是什么样子的，是不是因为换了无血清，死细胞多了，就觉得那是污染了呢？
tieshazhang (2012-10-19 15:42:36)
我急需两篇全文，各位师兄师姐帮忙找找吧，不甚感激！我的邮箱是liaozhangxiu@163.com
Casini A, Pinzani M. Milani S, Grappone C, Galli G, Jezequel AM, et al. Regulation of extracellular matrix synthesis by transforming growth factor pl in human fat-storing cells, Gastroenterology 1993; 105: 245-53.
Cassiman D, van Pelt J, De Vos R, Van Lommel F, Desmet V, Yap SH, et al. Synaptophysin: a novel marker for human and rat hepatic stellate cells. Am J Pathol 1999;155:1831~1839.
remenb (2012-10-19 15:43:44)
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的确是在换完液以后细胞的状态没有前24小时好，那时候镜下看会看到在培养瓶里细胞周围有好多象磨砂一样的东西。如果是培养板培养，就会看到有的孔内有很多针状的物质，但是培养基还是很清的，有的孔的颜色变黄了，表面浮着白的物质。有很多细胞已经脱片了。尤其是染完毒以后。
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