【求助】紧急求助一个关于细胞污染的问题！

最新回复

• bamboo16 (2012-10-22 20:51:26)

  怎么没人理我呀，我快急死了，请大家帮帮我吧！
  我仔细看了前面的帖子，发现有很多种说法，而且有很多人遇到这种问题，究竟大家的细胞后来怎么样了呢？我今天观察了一下细胞，发现细胞长的还可以，但是小黑点 也增多了！基本上小黑点不运动。

• dotaaa (2012-10-22 20:51:42)

  
  根据你说的情况象是支原体污染。支原体无细胞壁，在相差显微镜下呈暗色细小颗粒状，有类似布朗运动，位于培养细胞的表面和细胞之间。被支原体污染后，培养液不浑浊，多数细胞无明显变化，容易被认为细胞培养“正常”。但其会导致细胞增殖缓慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。
  支原体的污染主要来源于操作者和血清。支原体的最小直径为0.2微米，是可以通过滤器的。
  支原体污染的处理：A：100微克/毫升的卡那霉素处理3周，
  B：100-200微克/毫升的金霉素处理1周；
  C：50毫克/毫升的泰乐菌素处理6天。等
  支原体有各种耐药菌株，挑选方法根据情况而定。

• dotaaa (2012-10-22 20:52:04)

  支原体污染还可以高温处理：将污染细胞处于41度作用5-10小时，可以破坏支原体，细胞有少许的损伤，但可以恢复。
  支原体的污染彻底排除十分困难，对于支原体的污染主要是预防。

• bamboo16 (2012-10-22 20:52:32)

  谢谢dotaaa，我准备按你的方法先试一试。我的细胞最近状态还可以，很迷惑，如果是支原体污染，细胞最后结局会怎样？我可是刚买的细胞呢。

• 伊莎贝拉 (2012-10-22 20:53:05)

  是不是那种很小的点点

• 3648755 (2012-10-22 20:53:22)

  
  我的细胞有时候也会出现这些黑点，不过我后来没怎么管它，结果细胞生长状态还可以，试验效果也影响不大，但我也不知道到底是个什么东东？

• hold住 (2012-10-22 20:53:39)

  
  我觉得支原体污染有待商榷，细菌在10*40（物镜）下尚看不清楚，何况比细菌更小得支原体

• bamboo16 (2012-10-22 20:53:57)

  
  我也觉得有点可疑，因为都说支原体在高倍镜下不容易看到，我可是在低倍镜下就看得到，而且发现了快一星期了，细胞长势倒是不错。我最近也在犹豫不知该不该对它采取措施，加药物又怕影响细胞生长。

• 园丁## (2012-10-22 20:54:26)

  我上两个星期从CCTCC买的细胞(贴壁细胞），买回来后一直长的不错！今天换液时突然发现有很多小黑点，200倍时可清楚看见。有几瓶里面很多，有的只有少数几个。有点像大家所说的黑胶虫，但是小黑点的运动并不快，大多数不怎么动，少数原地或慢速泳动。细胞的生长状况目前还好。不知是什么污染，我的培养基里加了双抗的。如果是黑胶虫，从哪里来的？细胞培养室的无菌条件还是不错的，基本上天天都紫外消毒。请各位多多指教，帮帮我！实验开始了一个多月了，一直不顺！唉！先谢谢了！
  
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  我感觉不像是微生物污染。
  您可以全量换几次液试试（当然如果您的细胞不是特别娇嫩的话）。
  培养液中，血清的配制应该注意一下，最好是在4度下溶化后，再用培养基配制，因为如果直接把血清从冷冻状态下到37度溶化，就会产生一些沉淀！

• bamboo16 (2012-10-22 20:54:45)

  
  我的血清质量是不太好（国产新生牛，因为想节约），灭活后瓶底很多沉淀，但是最后的20ml我没有要。但是好像也不是血清的沉淀，因为它会增多，虽然不怎么运动。我基本上每次都是全量换液的，不过最近我每次换液都用pbs洗几遍，感觉小黑点好像少了很多。

• misswu61 (2012-10-22 20:55:01)

  我也觉得不是污染，可能是死亡细胞的残片，也有可能是血清中的渣渣，你可以在等几天。

• leifengta (2012-10-22 20:55:17)

  我认为不是什么污染，而是细胞分泌颗粒。我养的两种细胞，用的东西都一样，一种就没有什么颗粒虫子，另一个种细胞不太好养，在传代后的第一、二天就有挺多的颗粒在细胞周围，但等到细胞状态好了，就没有什么了。只是的注意勤换液。

• lixi559 (2012-10-22 20:55:37)

  
  我觉得如果那些小黑点不动，则有可能不是什么污染。可能是操作过程中什么被弄脏了，或者一些粉屑，我以前也遇到过

• bamboo16 (2012-10-22 20:56:00)

  谢谢各位的帮助，我最近也在密切注意它的长势，有什么新发现再与大家交流。

• is2011 (2012-10-22 20:56:22)

  
  其实灭活时血清中析出的蛋白等沉淀物37度久了也会增多的，我开始也以为是污染，后询问血清公司，他们发给我有关血清灭活的说明，中提到蛋白等沉淀物37度放置也会增多，但不会影响细胞的生长，我的细胞确实也没受到影响

• bamboo16 (2012-10-22 20:56:38)

  
  最近我的细胞一直长的还可以，但是又出现了新的问题！细胞里出现了一些透明的小亮点，比细胞稍小一点，有的很小，悬浮于培养基中。开始以为是死亡的悬浮细胞，后来看了前面的帖子，又觉得象支原体污染，哎，虽然细胞还在顽强的生长着，看来我还是只有忍痛扔掉它了！以前养细胞条件比现在差多了，都没污染过，怎么现在条件/技术都好了，反而老是出问题呢，真是郁闷啦！