【求助】几个神经元培养的基本问题（看似简单并不简单）

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-10-23 13:00 作者: tuomu45 来源: 分析测试百科网

本人打算培养大鼠皮层神经元，现有几个问题想请教一下前辈。
1. 有没有poly-lysine预包被好的96孔板商品可直接购买？
2. poly-lysine究竟是用poly-L-lysine好还是poly-D-lysine好，应选用多大分子量范围的？
3. 灭菌后的滴管在使用时，大家是怎样给加上滴头的？用手捏着滴管吗？
4. 铬酸洗液常用配方是什么？容器一般用什么好？什么地方能够买到？
谢谢！

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【求助】几个神经元培养的基本问题（看似简单并不简单）

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ROSE李 (2012-10-23 13:00:54)

QUOTE:
原帖由 tuomu45 于 2012-10-23 13:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

本人打算培养大鼠皮层神经元，现有几个问题想请教一下前辈。
1. 有没有poly-lysine预包被好的96孔板商品可直接购买？
2. poly-lysine究竟是用poly-L-lysine好还是poly-D-lysine好，应选用多大分子量范围的？
3. 灭菌后的滴 ...
To 3 用镊子把滴管从饭盒里拿出来，然后一个手拿滴管的大头，一只手把滴头装上。
To 4 我们用的容器是白色的大型的塑料桶。建材市场又卖的。
tuomu45 (2012-10-23 13:01:20)

不过Question 3用手拿大头，会不会造成染菌？
ROSE李 (2012-10-23 13:01:44)

操作时，手勤用酒精擦，不会造成污染的。本实验室用的洗液配方是：630g重铬酸钾、2L双蒸水、10L浓硫酸。先把水加热后，倒入重铬酸钾，让其充分溶解后再缓慢加入浓硫酸，加前2L时会剧烈放热、沸腾，要做好防护工作，后面就比较好加了，加的过程中要不断搅拌，不要让重铬酸钾析出。
本实验室用的是poly-D-lysine，0.1mg/ml，可以反复利用三次，效果不错。
yychen (2012-10-23 13:02:05)

其实滴管的上面不需要绝对无菌的
滴管的上部塞有棉花，吸出的液体不会碰到胶皮头
还有取出滴管后，在用之前用酒精灯烧一下
tuomu45 (2012-10-23 13:02:29)

那poly-D-Lysine的分子量范围是30000~70000还是70000-150000呢？有没有已预铺好的96孔板可直接购买？
leifengta (2012-10-23 13:03:16)

大鼠皮层神经元培养，我们这不用多聚赖氨酸处理的，只要用新的一次性培养板就可以。新买的培养板一般都已经过处理，神经元可以直接贴壁生长的。我们就一直这样培养，效果不错！
园丁## (2012-10-23 13:03:58)

QUOTE:
原帖由 tuomu45 于 2012-10-23 13:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
那poly-D-Lysine的分子量范围是30000~70000还是70000-150000呢？有没有已预铺好的96孔板可直接购买？

30000~70000的就可以了!
应用浓度一般0.05 mg/mL, 1h~overnight.
tuomu45 (2012-10-23 13:04:35)

谢谢！所谓的新板一般都经过处理了指得是经过了什么样的处理呢？神经元贴壁良好吗？如果后续要用MTT法测活细胞数，不包被板有无不良影响？谢谢！
ROSE李 (2012-10-23 13:05:26)

所谓的新板一般都经过处理了指得是经过了什么样的处理呢？
在传统的细胞培养中，影响细胞贴附和铺展的主要因素有两种：一是二价阳离子（DC）；二是吸附糖蛋白（AGP）。这两种因素在细胞和微载体的相互作用中扮演一种类似“桥”的角色，这是因为：在正常生理pH下，真核细胞表面带有不均匀的负电荷，而传统的培养基质（如塑料、玻璃）表面也带有负电荷，在这样的相互作用模式下，细胞显然无法贴附到微载体上，但在这个系统中引入“桥”后，“负电荷—桥—负电荷”相互作用模式是可行的。另一类微载体表面带正电荷（如DEAE-葡萄糖类微载体），于是有“正电核—负电荷”相互作用模式。实质上，这两类相互作用模式存在于每一个微载体，只是其中一种占优势而已。
细胞和微载体相互作用的强弱不取决于电荷的极性，而是由电荷的密度决定的。细胞培养用的微载体应具有合适的电荷密度，因为电荷密度过低时，细胞吸附到微载体表面开始生长，然而它们又很快脱落下来，并聚集成团；电荷密度过高时，细胞吸附到微载体表面并铺展，然而却不生长。
国际市场上出售的微载体商品的类型已经达十几种以上，包括液体微载体、大孔明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等
ALALA (2012-10-23 13:05:55)

大鼠皮层神经元培养，我们这不用多聚赖氨酸处理的，只要用新的一次性培养板就可以。新买的培养板一般都已经过处理，神经元可以直接贴壁生长的。我们就一直这样培养，效果不错！

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请问：你们用哪里的板可以不用poly-l-lysine包被的？
我们的如果包被不好会出现神经元掉下来啊