【求助】细胞消化的问题

最新回复

• yhz1973 (2012-10-23 13:29:12)

  
  以前我也碰到过这些情况，不过按照我的观点，可以适当延长细胞消化时间，然后就是用电枪吸打充分，要不就是EDTA加量看看可以不？

• xevin (2012-10-23 13:29:38)

  
  1)增大EDTA量
  2)延长消化时间
  3)耐心地轻柔地坚持吹打,甚至可以试试先吹打,后终止消化.

• mamamiya (2012-10-23 13:30:02)

  胰酶的量也要加大

• star#room (2012-10-23 13:30:41)

  
  0.25%的胰蛋白酶吧，加EDTA,稍微时间长一点，5－10分钟试试，但是当心时间长了对细胞损伤哦。

• +小生怕怕+ (2012-10-23 13:30:59)

  
  Re:求助：细胞消化的问题
  最好用胶原酶吧,胰酶对胰岛细胞损伤很大的，时间可能要长一点,否则很难消化下细胞的。

• 小螺号 (2012-10-23 13:31:17)

  
  可以加一点胶原酶试试，混合酶消化法。

• caihong (2012-10-23 13:32:03)

  
  除了以上的方法外，你可以在37度中多放置几分钟

• xingyi08 (2012-10-23 13:32:25)

  
  1、适当加点胰酶
  2、延长消化时间
  3、放置37度温箱孵育
  4、吹打
  我前几次也是遇到相同的问题，反复吹打后，细胞大多为单细胞悬液了

• qianqin1977 (2012-10-23 13:32:50)

  不用EDTA，只用胰酶，先用D-hank's洗掉残留培养基和血清，然后按1ml胰酶/10cm2培养面积加入，镜下观察，待到细胞回缩明显且尚未脱壁时（这个过程不超过1分钟），倒掉大部分胰酶，只保留细胞表面被少量胰酶湿润，37度培养箱中放置5-15分钟，直至细胞可象流沙状下滑，加入含血清培养基终止消化，轻轻吹打使细胞散开，如有团块，可考虑200目筛过滤，可不洗涤离心细胞。此种方法对细胞伤害最小，如果做流式细胞分析，也可用此法，只不过在胰酶中加入等量EDTA溶液，出来的峰极规整漂亮。
  某些细胞只用常规培养基不行，还必须补充生长因子或特殊量的氨基酸才能正常生长，要多参考相关文献。

• huifeng0516 (2012-10-23 13:33:27)

  
  用0.125％胰酶，磁力搅拌10min，37度，洗去胰酶，悬浮细胞，镜下就可见细胞呈单个状。