【求助】为什么MTT实验试剂空白会显色？

最新回复

• mamamiya (2012-10-25 17:38:04)

  
  我不知道你测的是用什么处理后的细胞。可是我看师兄做的试验好像每个空都有颜色的。只是深浅问题。你的空白里面是不是除了DMSO和MTT在没有其他的试剂了。而且，要是染菌的话。是不是也有可能呢？

• owanaka (2012-10-25 17:38:22)

  
  这个问题碰到过.正常空白调零孔会显色,因为里面有培养基和血清,培养一段时间可析出,加上MTT照样显色.当然空白调零孔OD值不能太高,注意排除细菌污染,要观察培养箱水槽.若水槽水没有,血清更容易析出.实验要慢慢摸索.

• zzzz (2012-10-25 17:39:21)

  
  我用MTT有颜色反应（比对照深），但在显微镜下看不到细胞，细菌也会使MTT显色反应吗？

• yychen (2012-10-25 17:39:45)

  这个问题碰到过.正常空白调零孔会显色,因为里面有培养基和血清,培养一段时间可析出,加上MTT照样显色.当然空白调零孔OD值不能太高,注意排除细菌污染,要观察培养箱水槽.若水槽水没有,血清更容易析出.实验要慢慢摸索.
  
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  我不太明白这位朋友的意思，血清析出？能说得更明白一些吗？

• yychen (2012-10-25 17:40:23)

  
  细菌也能代谢MTT使之转化为甲月替吧。
  但是如果排除了细菌污染呢？

• yapuyapu (2012-10-25 17:40:44)

  
  因为在培养过程中实际上培养基的水分会丧失，而且培养基里面的成分也会沉淀．同样也会和ＭＴＴ反应，这就是我们设调零孔的目的，即排除非凋亡细胞引起的甲瓒颗粒．就是说在加药和阴性对照中也有同样的反应，必须扣除，否则抑制率计算就出问题．

• huifeng0516 (2012-10-25 17:42:52)

  dmso是可以和过量的mtt反应的

• tie8 (2012-10-25 17:43:12)

  
  贴壁细胞，做了细胞毒性以后，该哪一步洗去死细胞呢？是在加MTT之前？如果之后才加好像死细胞也大量结在一起，再用PBS洗容易整块结晶掉下来，即使用反转法也是如此。其实我们细胞攻击实验做的可以的了，镜检梯度已经相当好了，就是到了检测这一步老是做不好：（还请各位指点指点，老弟时间紧迫了！

• vvmmoy (2012-10-25 17:43:31)

  
  我做过两次也是
  而且上次空白孔值很告
  甚至什么连真正空白孔（什么都没有）都有读数
  真是郁闷！
  而且我也遇到了和楼上朋友相同的事
  加了MTT后，镜下观察明明看到许多细胞扒壁，就是没看到多少颜色加深
  加了DMSO后测的值也不高
  我做的是细胞兴奋性试验，没看到死细胞，所以没有洗。
  不知道是什么原因？