【求助】细胞消化问题

最新回复

• wood533 (2012-10-27 12:46:21)

  我们实验室用的是0.25％胰蛋白酶，效果一直不错。不过我们的细胞是贴壁生长的。配方及其他酶液的选择可以参考《细胞实验指南》。

• 小螺号 (2012-10-27 12:46:45)

  我们这边也都是用胰酶消化，有的用的是细胞刮片。我知道一个师姐养的细胞不好消化，她就是先用胰酶消化一会，再刮下来的。
  具体要看你的需要。

• xueyouzhang (2012-10-27 12:47:06)

  
  我用过0.25％胰蛋白酶，效果挺好，后来养了一种很难消化的细胞，需要30分钟才好，换成带EDTA的0.53毫摩，胰蛋白酶浓度降到0.05%，只要三分钟就好了

• 雪山飞鹿 (2012-10-27 12:47:35)

  
  只要3分钟吗？我们以前用胶原酶消化需要1小时呢？我的细胞也是贴壁生长的，请问，还需要其他酶液吗？能不能将你的配方共享一下，（当然，如果不保密的话）谢谢！！！

• junhun (2012-10-27 12:47:55)

  
  如果胰酶浓度高，可以缩短消化时间，此外，可直接吹打把贴壁细胞吹下，只是会损伤很大

• mimili_901 (2012-10-27 12:48:20)

  我们实验室配的是1%的胰酶，用时每100毫升加2毫升0.5% 的EDTA，消化细胞时根据经验，难消化的细胞加1滴管D-Hanks，半管（约8滴）消化液，好消化的细胞减量，放在37度几分钟，根据不同细胞，过几分钟放在倒置显微镜下观察，细胞大部分变圆时吸出消化液，加入1管D-Hanks和1管培养基，盖上培养瓶盖，用手掌拍打瓶壁几次，再用滴管吸取瓶内液体吹打几次就消下来了。细胞贴附的紧密程度差别很大，要自己摸索。

• cj_mondy (2012-10-27 12:48:41)

  我们实验室用0.1%胰酶+0.1%EDTA ,效果很好可以试一下。

• abc816 (2012-10-27 12:49:04)

  
  我们实验室用0.25%的胰酶，一般37度消化2-3分钟即可。对于难消化的细胞，在胰酶消化前加用0.03%EDTA，效果不错。

• feima+ (2012-10-27 12:49:26)

  
  大家的经验是很重要，但具体是什么细胞，细胞的种植密度也有关系！需要摸索一下！同样有个问题请教大家，多长的消化时间是最合理的？谢谢！

• 雪山飞鹿 (2012-10-27 12:49:50)

  
  我同意你的意见，我培养的是原代细胞，以前都用胶原酶消化，因为价格太高，想用姨蛋白酶消化，但消化了一个小时，效果还是不好，为什么？？