【求助】请教细胞冻存过程中是否需要离心？

最新回复

• BUK (2012-10-27 13:01:15)

  不需要吧！
  我们这里冻细胞，就是细胞长到一定密度，加入配置好的冻存液，就可以了，不需要离心

• zhezhe (2012-10-27 13:01:41)

  不用离心的，看细胞长得状态好的话直接加入冻存液，吹散细胞，冻存就可以了

• 小鱼鱼 (2012-10-27 13:02:11)

  
  最好离一下心，再重悬，使冻存液充分混于细胞。

• gemei0115 (2012-10-27 13:02:43)

  
  还是离心一下比较好，按照ATCC的protocol，要获得良好的动物细胞冻存效果，这一步不可缺少。
  因为一般情况下，需使用胰酶消化细胞，才能下得来。中止消化要用到含血清的DMEM,而非含DMSO的冻存液，因为这样会消耗血清中固有的胰酶抑制物成分。我的做法是，终止消化后加培养液吹打成单个细胞，吸取少许快速计数细胞，同时100g离心3－5分钟（无需太高速及太长时间，目的使细胞下沉又尽量减少损伤），使细胞呈松软的小沉块。之后弃上清，加冻存液，吹打成均匀的悬液，冻存。老外甚至常规加做台盼兰活性检测。

• tuuu2 (2012-10-27 13:03:50)

  
  我的经验：如果做细胞培养时间较长，在镜下观察细胞密度，应该大概估算出细胞密度，先用胰酶消化细胞，不要太久，大部分细胞不脱落而又能吹下来最好，吸去胰酶和悬浮的细胞（有损失），再按估算好的体积加入冻存液吹打细胞，收集至冻存管。这样做的目的一是减少离心损伤，二是减少操作步骤，三是避免胰酶和冻存液中的血清作用，供参考。

• junjie05 (2012-10-27 13:04:20)

  
  1. 选择细胞状态佳的细胞。
  2。只用胰酶消化就可，消化好后弃酶，入冻存液吹散。
  3。封瓶直接冻存。这样对细胞的保护最好。
  
  注意：
  1。不用离心，离心为去凋忘细胞，细胞状态好时不用。
  2。处理的简单就是好，别信书本。

• summerxx (2012-10-27 13:04:51)

  
  你消化好后弃酶不离心的吗？怎么弃去？

• gogo (2012-10-27 13:05:17)

  
  当然要离心,调整细胞浓度后加冻存液

• 831226 (2012-10-27 13:05:49)

  
  冻存过程中离心或不离心，我的经验是关系并不太大。但冻存过程中降温要慢，复苏时升温要快！这点很重要，也就是说慢冻速融的原则一定得遵循。

• zsxan1990 (2012-10-27 13:06:09)

  
  要离心, 因为细胞冻存时需 5~10 x 10^6 细胞/ml，而培养到要换液时根本达不到此浓度。故应1000 rpm 5 分钟离心已浓缩细胞。还要注意，细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含10 %DMSO 和90 % 原来细胞生长用之新鲜培养基的均匀混合物。由于DMSO 稀释时会放出大量热能， 故不可将DMSO 直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。