【求助】密度梯度离心求助！

最新回复

• newway (2012-10-31 13:32:20)

  
  你事做什么得啊？怎么要那么多得血液啊？

• gemei0115 (2012-10-31 13:32:41)

  各个离心机的离心力不同，还有倾斜式离心机与水平式效果也有差别，需要自己细心的摸索，书上只是说了20min/2000r, 最佳的时间速度需要摸的，具体说来，如果在你现有条件下，处于中部的分层液混浊，而在底部的红细胞层表面没有明显的白细胞沉着，建议适当提高速度或延长时间；与次对应，如分层液混浊，红层已有白细胞沉着，建议减少时间。供你参考。

• fei1226com (2012-10-31 13:33:01)

  
  我要分200ml血啊，50ml的离心管也要分很多次。eppendorf离心机，1400r/15min什么都没有，红细胞还没沉下去，上面的血浆就沉到分离液了，不知为什么。（我用30ml稀释血加到15ml分离液）

• 笑弯了腰 (2012-10-31 13:33:22)

  请教网友，俺的分离液说明书上标明离心力是800G，离心半径为9cm，按计算转事业应为2700转，俺离了30分钟，底层是红细胞，上层是血浆，中层居然为红色(为红细胞混悬液)，在血浆与红细胞混悬液界面上有白色的一层，这是怎么回事，离心时间是长还是短了？谢谢!

• loli (2012-10-31 13:33:40)

  可能是淋巴细胞分离液的量太少的缘故吧,我们用的一般分离液与被分离的液体比例为1:1,另外,你离心的转速和时间加长一点,比如2500r*30min试试

• zhenxin (2012-10-31 13:34:20)

  QUOTE:

  原帖由 笑弯了腰 于 2012-10-31 13:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  请教网友，俺的分离液说明书上标明离心力是800G，离心半径为9cm，按计算转事业应为2700转，俺离了30分钟，底层是红细胞，上层是血浆，中层居然为红色(为红细胞混悬液)，在血浆与红细胞混悬液界面上有白色的一层，这是怎么回事，离心时间 ...

  这种情况倒是没有遇到过，真说不好，不过，你的分离液到了室温吗？可能密度不均？还有就是，你的标本是正常人的还是病人的？凝了吗？有块吗？偶尔还是一直这样？

• 笑弯了腰 (2012-10-31 13:34:42)

  
  说起来脸红，这种分离液俺首次用，以前用的分离液转速1500转即可，实验室的老师们其转速很少超过2000转，所以俺一直都看不到雾层(用的达科为的1.077)。上到2700转才第一次见到白的细胞，用的是病人的抗凝血，1：1盐水稀释后，分离液：血=1：2。但不是常温，分离液是从冰箱取出来就直接用了。

• 二丫头466 (2012-10-31 13:35:02)

  
  我用的分离液是Amersham Biosciences 的Ficoll-paque plus，说明书上明确表示，将抗凝血加到分离液之前要与等体积的平衡盐溶液或hank's balance solution混匀，注意平衡盐溶液中不要混有血清，这样才能形成适当的密度差异。
  另外，无论用怎样的离心管，加工后的血样本和离心液的高度比值为2.4cm :3.0cm最佳。

• zhenxin (2012-10-31 13:35:30)

  但不是常温，分离液是从冰箱取出来就直接用了。
  
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  使用前半小时从冰箱中拿出，置常温，直接使用可能密度不均，没有达到要求。试试吧。

• zhenxin (2012-10-31 13:35:47)

  
  如果离心机可以手动调速的话，还可以刹刹车，就是快到时间的时候，慢慢地把速度调下来，可以减少速度突然下降导致的晃动。

• 8964357 (2012-10-31 13:36:06)

  
  上面大哥说对了，我今晚总算搞出来了，就是因离心机刹车太快的原因。我改了设置让它缓慢减速就有那圈细胞了