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【求助】我养的细胞怎么莫名其妙地死掉了?
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我养肿瘤细胞,是别人复苏后送给我 的,开始十分顺利,"长势喜人",可是大约传了四代后,前天晚上传了第五代,可是一直到今天上午还没有贴壁, 呈圆点抱团悬浮状（活的细胞是细长的，是hepG2,角状）,像极了死的.以前都是一夜就贴壁的!
这几次的培养液、胰酶都是一次配好的，器皿也是同一次消毒的。真不知怎么回事。
污染了吗？
还是细胞本来状态不好，传代次数过多？
大家有谁遇过这种情况吗？
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最新回复
2541 (2012-11-02 11:42:58)
分析一下，可能有以下几个原因：
1、传代的时间控制，
2、细胞瓶的选择，瓶子和瓶子之间也有可能有差异；
3、消化的时间控制也会影响到贴壁的状况；
4、吹打过了也会导致细胞生长不好
......
仔细思考一下你前天晚上传代的所有细节，看看有很什么不妥，或者想想这个过程会不会是逐渐的发生的，祝你好运！
hulu呼噜 (2012-11-02 11:43:22)
H2O (2012-11-02 11:43:49)
首先，跟传代的次数没有关系！也不是原来的状态不好！
可能的原因：
1 胰酶消化过了。
2 血清不好。是不是换了血清了，找找这个原因。
3 培养瓶没有刷干净。
4 检查检查培养箱，二氧化碳之类的。（这个可能性不大）
偶觉得不外乎这么几个原因！
langlang (2012-11-02 11:44:41)
QUOTE:
哦,谢谢血清每换,一直是同一瓶培养基,我估计可能是胰酶消化过了,不过以前胰酶消化时间比这时间都长.
培养瓶也是同一批洗过用的
H2O (2012-11-02 11:45:18)
偶每次消化都在显微镜下观察。
DDD (2012-11-02 11:45:43)
胰酶消化过头，因该是唯一的原因。
具体表现应该是：细胞不贴壁，细胞圆形，透光度，折光率差，细胞聚集成团悬浮，少量贴壁者成圆形，状态差，或者还有团块状细胞与之连在一起。
觉得如何，呵呵，其他原因不是不可能，只是一般传代是不用换瓶的，所以瓶子没问题，如果用了新瓶子那应该多瓶都出现同样的问题。一次配的培养基刚传了四次，不可能用完。以前没问题也不可能重配新的培养基，所以不是培养基或血清的问题。就算24小时不给细胞CO2细胞一样贴壁，生长，所以不是气体的问题。胰酶的活力与环境温度有关，所以时间不是唯一因素，所以可能会出问题，而且搂主似乎刚开始养细胞，可能对该细胞生长习性不是很孰，所以，呵呵，就是他了
langlang (2012-11-02 11:46:31)
是啊，我是刚开始养细胞，
不过我以前都是消化3分钟，这次还不到3分钟就出现这种问题了，这怎么解释？难道胰酶活性有变？都是一次配制的
郁闷！！！
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而且搂主似乎刚开始养细胞，可能对该细胞生长习性不是很孰，
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细胞生长习性要怎样才能熟悉？看资料吗？我前四次传代都好好的，这次也和以前一样的啊！
H2O (2012-11-02 11:46:48)
胰酶的活性跟温度和pH值有关，一般来讲，胰酶会越用越不好使，因为时间久了会变酸，在pH=8,温度37度的时候活性最高，你消化3分钟，时间有点长，我们一般是1分左右，你刚开始养，最好在显微镜下观察，因为你每次试验加的量可能不会那么准，所以时间就不好控制。
建议你在培养瓶里再加点血清，估计就会贴壁了。
阿k (2012-11-02 11:47:34)
我是在室温下消化，有38.5度，那对胰酶的活力有什么影响啊
kuaizige (2012-11-02 11:48:05)
可否检查一下有没有支原体污染。
avi317 (2012-11-02 11:48:31)
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