【求助】请教MTT问题，急！

最新回复

• mickeylin (2012-11-02 11:56:13)

  
  是不是硫化砷和MTT发生了反应,你自己查查看吧!

• 鹅鹅鹅 (2012-11-02 11:56:35)

  你从镜下看看，颜色深的是不是细胞多，如果细胞不多，就说明是其他成分干扰了反应。再做进一步的分析。

• wanglaoshi (2012-11-02 11:57:20)

  
  我做了试验，MTT与硫化砷发生反应，浓度越高，颜色越深，有办法改进吗？谢谢！

• glass (2012-11-02 11:57:42)

  我也遇到类似的问题，估计是药物对OD的影响。
  我的办法是设置一组同浓度梯度的药物空白组，在计算时减去该组空白得实际OD,再按照通常的公式计OD值。
  如果是悬浮细胞，最好用平板离心机离心，再将液体甩干这样就可以减小干扰。

• zzzz (2012-11-02 11:58:01)

  应该是MTT与硫化砷发生反应产生了颜色，可以在加入MTT前用无菌的PBS小心的冲2-3遍，再加入培养液和MTT，可以避免MTT与药物的作用

• glass (2012-11-02 11:58:30)

  
  可以用最原始的细胞计数板初步判断细胞的增殖情况。设置对照：空白培养液；含硫化砷的培养液。

• memory (2012-11-02 11:58:50)

  加MTT前，小心吸弃含药的培养液。再加不含药的培养液，随后加MTT。

• qqq111 (2012-11-02 12:00:16)

  
  谢谢各位了，我在加MTT之前，用培养液洗过后，硫化砷的影响好像是没有了，但就是所测的值偏小了，只有0.1左右，不知是否合理？

• yychen (2012-11-02 12:00:44)

  应该说是合理的，只要组间比较有差异就行。MTT法检查细胞数也是一个相对的指标，有点类似细胞计数，只是更加客观一些。如果说是因为硫化砷与mtt反应影响吸收值，那么各个组都冲洗后，至少组间的变化是一致的。不影响结论就算成功。
  
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  所测定的值偏小可能有很多原因：1。洗掉了一些细胞，2。有些细胞在培养液冲洗过后（或者说换液后）需要过几十分钟才能进入正常的生长状态。（MTT检查的值与细胞和细胞线粒体的代谢状态有关）3。每次接种的细胞数可能是不完全一致（尽管接种前都做细胞计数），细胞数的多少直接影响测定值。
  
  你做的是悬浮细胞，冲洗，离心肯定会造成细胞的损失，也会造成细胞活力的下降，也可能造成一些细胞死亡，死亡的细胞用MTT是监测不出来的。