【求助】sp2/0细胞复苏培养求助

最新回复

• greenbee (2012-11-02 14:39:26)

  复苏时，等溶解后，将其转移到有适量无血清的1640中，混匀后离心，去除DMSO，然后加20%小牛血清的1640培养即可

• DONT (2012-11-02 14:39:47)

  
  要用20％那么多 啊？是先离心再用1640洗一次还是直接用1640稀释后离心呢？？不过看atcc上说直接培养次日后离心也可的那。真不知道什么问题

• plaa (2012-11-02 14:40:10)

  
  复苏后用40度水浴尽快溶解，连同冻存管离心，之后换新鲜含20%CS的1640。次日换液。
  总之DMSO要尽快去除

• DONT (2012-11-02 14:40:55)

  
  复苏后用40度水浴在一分钟内快速溶解，直接用1640稀释后离心（1-2次）。换新鲜含8-10%FCS的1640培养就可。

• H2O (2012-11-02 14:41:16)

  我们是用10%FCS+90%DMEM+1%L_g培养液.
  复苏时尽量在1分钟内静止融解,这点很重要.

• JK.jon (2012-11-02 14:41:38)

  
  一般国内常用的方法是复苏过后离心然后培养，但是我们实验室用了一个德国的冻存KIt，说明书上还是推荐复苏后直接用带有血清的培养液稀释即可，上面认为离心不但损伤细胞，而且会导致细胞的损失。我们实验室经过试验和经验觉得两者复苏的效率是差不多的。
  还有一条很重要复苏时不要等全部融解后在处理，大概到90％时然后摇动即可，因为DMSO在常温下对细胞的损伤是非常大的，更不要说37度了，要注意一点。

• milkdog (2012-11-02 14:42:11)

  
  总之记住两点：
  
  1。应该在尽可能短的时间内使冻存细胞融解 （as soon as possible）。
  
  2。应该尽可能早地去除培养液中的DMSO。

• feima+ (2012-11-02 14:42:55)

  
  我们是用10%FCS+90%DMEM+1%L_g培养液.
  复苏时尽量在1分钟内静止融解,这点很重要.
  
  静止融解是什么意思啊？
  不是需要搅动吗？直接放到37度水中就可以了？
  
  还有一条很重要复苏时不要等全部融解后在处理，大概到90％时然后摇动即可，因为DMSO在常温下对细胞的损伤是非常大的，更不要说37度了，要注意一点。
  
  大概到90％时然后摇动即可？？什么意思？等到融了90%才开始摇动？

• 911 (2012-11-02 14:43:32)

  你好，我现在需要SP2/0细胞，你复苏好后能否送我一些？我在南京，谢谢

• shenkunjie (2012-11-02 14:44:01)

  
  我的意见与soso-fan 的一致，不能完全的溶解，要依靠余热。