【求助】谁养过单个核细胞

最新回复

• dragonkilly (2012-11-02 14:47:17)

  
  你说的单个核细胞，是不是PBMC呀？
  1. 外周血单个核细胞含有多种细胞成分，其中淋巴细胞是可以贴壁，而巨
  噬细胞则不贴壁，如果想进一步分离，就可以利用这一点（贴壁）进行分
  离。
  2. 细胞浓度一般调到10,000---100,000个/mL
  3. 1640 培养基里面一般含有20％的胎牛血清，双抗终浓度
  PG 100u/ml, 链霉素 100u/ml,还有NaHCO3(我在1000ml 中加1.8－2克），有
  的人喜欢加HEPES
  4. 我们这里维持细胞生长又不然它增殖，一般采取用含2％的胎牛血清1640
  培养基进行维持。

• greenbee (2012-11-02 14:47:41)

  
  外周血中，淋巴细胞贴壁，而巨噬细胞不贴壁？？怎么感觉好像说反了。应该噬淋巴细胞不贴壁的吧？

• greenbee (2012-11-02 14:48:09)

  细胞因子我们用的是IL-2,IL-7.

• bgf5 (2012-11-02 14:48:42)

  
  培养血清10%就够了，要加双抗，直接放在EP管中培养，用时离心，很方便

• 小野花 (2012-11-02 14:49:29)

  外周血中，淋巴细胞贴壁，而巨噬细胞不贴壁？？怎么感觉好像说反了。应该噬淋巴细胞不贴壁的吧？
  
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  我也觉得是这样的,噬淋巴细胞不贴壁

• 987789 (2012-11-02 14:50:14)

  
  首先，最好把你的培养条件先写出来，这样大家才好给你分析一下
  就我培养单个核细胞的经验来说
  1，刚分离出来的pbmc培养时，最好在10%NCS+1640的基础上，再滴加一些人的血浆（就是分离新鲜血pbmc的时候最上层的液体），这样会促进细胞的生长。
  2，加入合适的刺激剂，pbmc的培养过程中，如果不加入刺激细胞增殖的细胞因子，一般一个星期左右就会全部死去。
  加IL-2，能促进T 的生长，
  如果想特异性的促进 CD4T或CD8T的增殖，还要加入抗CD4或抗CD8的单克隆抗体，如果想让总T增加，加如CD3单抗就可以了。
  加il-4，能促进B细胞的生长
  另外，t细胞是不贴壁~~

• bling (2012-11-02 14:50:38)

  
  各位前辈：我已经提了几次人pbmc，分离效果还可以。分离后在倒置的显微镜下观察：细胞亮晶晶，只是细胞数目没有前辈们贴的 照片那么多，很稀。我用的5ml全血。
  1640培养基成分：RPMI1640 10.4g；HEPES 4.766 g; 谷安酰氨 0.3g；2％的2－巯基乙醇 1.8ml; NaHCO3 1.0g 加水定容到1000ml
  qinmeisu:100u/ml 链：100u/ml
  10%的小牛血清
  
  培养条件：37度 , 5％ CO2
  问题是：我提的很好，加了自体血浆，第二天换液的 时候就发现细胞数目减少，有很多死细胞飘，另外我发现1640不稳定，上述的1640培养基不加细胞在培养相里变黄，不知是什么原因？？？
  
  我得试验要求的PBMC数量要达到1.5*106数量级，可我今天细胞计数板计数的 结果才有：2×105数量级，远远不够的。
  
  以后需要培养病人的细胞是单个核细胞，如你们所说的 话，加一些刺激因子，有同时刺激单核和淋巴细胞生长的因子马，再说，这样刺激的话，我要用elisa试剂盒检测pbmc核蛋白的表达还有没有意义阿
  
  有养过的前辈告知

• ffooll (2012-11-02 14:51:26)

  
  各位好，我现在也开始养PBMC，我想问一下，在照片中的那几个白细胞周围的那些点状的东西是不是血小板啊？
  

  
  56781791.snap.jpg

• newway (2012-11-02 14:52:28)

  照片的细胞 是第几天的？

• yapuyapu (2012-11-02 14:52:53)

  照片是第二天的，没有加血浆和血清，只是用了RPMI1640液。