【求助】内皮细胞培养

最新回复

• 盼盼 (2012-11-03 10:59:54)

  
  人脐带静脉内皮细胞确实比较难培养的，细胞密度低是其中的一个原因，但是我觉得还是细胞本身不太好养，而且在不加生长因子的时候只能传两代左右，所以我们一般传了一代就用了。

• wmp1234 (2012-11-03 11:01:25)

  你好
  我用的培养基是M199，假如400u胰岛素/L，一支肝素钠，双抗。滤前调PH值至7.29。请问你用的是什么培养基？添加了什么成分？

• hyuu (2012-11-03 11:02:13)

  
  我一直养人脐静脉内皮细胞的，挺好养的。大体有这几方面的问题，你说的不详细，我不知从哪方面告诉你。
  1）培养液85％的高糖DMEM，15％的新牛血清，每100ml的培养液加100ul的双抗。
  2）复苏、冻存过程对你以后养的细胞影响均较大，复苏时1000－1800转/分，五分钟，去除离心液加入培养液将细胞吹打开来，几小时后细胞就贴壁了，长满后传代就可以了，一般传代开始后只要不污染就不会死的
  3）冻存，冻存液为70％DEEM,20%新牛血清，10％DMSO，如果冻存这一步出了问题，复苏后的细胞是不容易活的。
  你先看一下，如果还没找出原因，再发贴吧

• tuuu2 (2012-11-03 11:03:59)

  
  但我是原代培养的内皮细胞，不是解冻的呀

• kswl870 (2012-11-03 11:05:20)

  
  在脐静脉内皮细胞的原代培养中有几点很重要：
  首先取的脐带的质量很关键。脐带要细，血凝块要少，色泽要红润一点的。如果脐带水肿、发黄，血凝块多，说明缺氧时间长，其内的内皮细胞状态已不好。
  其次，原代培养时，消化这一步很关键。时间太短，细胞消化不下来，时间太长，对细胞损伤大，细胞不易存活。而消化时间又和温度密切相关。象在夏天消化时间就比冬天时要相应缩短。
  再次，原代培养细胞时，要尽量缩短操作时间；细胞种植到培养板或培养瓶后，置培养箱内，忌来回移动，减少开关培养箱的次数。第二天仅需观察一下培养基的颜色，第三天再于镜下观察细胞。
  一般来说，细胞密度高一点，有利于细胞的生长，细胞密度低时，细胞生长慢，但不会都死掉。所以，我总觉得你的细胞不是密度的问题。因为我不知道你具体的培养条件、方法和操作，所以我没法帮你判断。我第一次预实验时，将一条脐带的内皮细胞都种在了一个小瓶里，48h后观察细胞都长成了铺路石状。如果你觉得是细胞密度的问题，那你也可以这样试试。
  熟能生巧，祝你实验顺利！

• wmp1234 (2012-11-03 11:06:55)

  我做脐静脉内皮细胞的原代培养时，用的是0.25%胰蛋白酶+0..2%EDTA-Na2，没有调PH值，这有没有关系呢？
  再，你用的培养基是哪一种呢？有没有加别的东西？PH值是多少？原代细胞一般几天传代？你做的细胞传了几代？

• qhyu (2012-11-03 11:07:46)

  我们用的就是一般的1640培养液，原代消化用的是胶原酶，以后传代用的是0.25%胰蛋白酶+0..2%EDTA ，我们一般只能传1－2代。

• S6044 (2012-11-03 11:08:15)

  我分的内皮细胞能传10代

• yapuyapu (2012-11-03 11:09:03)

  养脐带静脉内皮细胞（HUECV）没什么技巧，本人培养原代HUECV很久了。一个字，钱。ATCC有原代的HUECV卖，当然不是ECV304啦，7000元一株。培养用专门的培养基，1000元250ml。自己养原代HUECV，培养基要加sigma的内皮细胞生长支持物1000元/支)，血清要进口血清(100ml/1000元)，四季清的不行。算到底培养基的价钱比ATCC的还贵。快1500元/200ml了。
  没钱可不可以养呢？当然可以，就出现上面这些兄弟说的毛病了。什么只能传2带，什么容易死呀。
  事实上，HUECV要培养4－5带用比较好，这时的细胞，形态规则，培养的细胞杂质很少，很漂亮了。一般传10带没问题，我最多试了一下，传了20带还可以长。
  现在养HUECV的同道越来越多了，没钱的话，奉劝大家别养。何必呢？很好养的东东，被搞得那么麻烦。很简单，比如你用国产的四季清血清，细胞马上就长的很慢，一传代就不怎么长了。这血清还不是最差的，也200元/100ml了。那当然只能传个2带啦。不加sigma的血管内皮细胞支持物，那更加不行了。
  至于消化脐带，胶原酶，胰酶均可。培养基1640，m199，DMEM均可。没那么严格的，培养基到位的话，很好养的。长的飞快。3天就传代。
  经验之谈，斑竹要加分哟。

• wmp1234 (2012-11-03 11:09:34)

  我分的内皮细胞能传10代
  
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  能告诉我你的培养过程吗？

• mamamiya (2012-11-03 11:10:11)

  
  相关疾病：
  肿瘤
  如果你是用新鲜脐带做原代培养，用胰酶消化时要用0.1%的浓度37度消化10分钟，开始密度要种的密一些，血清不要用国产的，我用Hyclone的很好，培养基DMEM和M199都行。但只能传1、2代，如果你嫌麻烦，可以买细胞系，很好养。联系电话：北京市肿瘤研究所，01066179250，找胡颖老师。大约4、5百块钱，但从血清里你就可以省出这部分钱，用国产血清它就能长得很好。