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标题:【求助】脾细胞培养

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发表于 2012-11-3 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】脾细胞培养


本人做了脾细胞培养半年，都 没有做出来，目的是提总RNA，每次脾细胞培养时在脾细胞悬液中加ConA 终浓度为5ug/ml 后发现细胞总是凝集成团，细胞死亡，细胞活化低，没有目的基因表达，请各位大师救命
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发表于 2012-11-3 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

脾细胞培养时在脾细胞悬液中加ConA 终浓度为5ug/ml 后发现细胞总是凝集成团，是何原因，如何解决，请各位大师相助
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发表于 2012-11-3 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你做了不加ConA的对照吗？如果没有加ConA的脾细胞在培养过程中也出现同样情况，那就要考虑是不是细胞被污染。另外，脾细胞在体外只能进行短期培养。
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2012-11-3 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你在什么时候加的ConA，我以前也做过，很容易的，不知道你的步骤是什么，我通常在分离了细胞之后立刻加入ConA，提取的时候直接在培养瓶加裂解液，就行了
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发表于 2012-11-3 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，多谢您的意见，我做过对照，对照组没有这种情况，请多指教。
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发表于 2012-11-3 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上群友，你的意见很好，你的意思是不是说在培养瓶内连红细胞一起培养是吗，收获细胞时再***红细胞提总RNA，是吗？你的意见很重要，请回复，再次感谢！
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发表于 2012-11-3 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是说从红细胞中 提，我原来是用贴壁的细胞提的，所以分离了脾细胞后没有加红细胞裂解液，加入 ConA后培养三天，红细胞有的已经死亡，弃去上清后，加裂解液开始提，我试过加红细胞裂解液，对细胞损伤很大，所以我自己认为可以不裂解红细胞，另外你分离细胞的时候一定要注意无菌操作，最好在无菌室！
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发表于 2012-11-3 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢您的回复，再次请教，脾细胞的主要是淋巴细胞为主，不是悬浮培养的吗，我今天再做了一次，本想不***红细胞，但在分离细胞时，刚开始时是单个细胞，但静置半小时后便发现细胞有部分凝成团块了，不知是何原因，另外如果不裂解红细胞，会不会出现红细胞凝血现象，另外裂解后在显微镜下可见部分细胞表面有一些纤维样的东西，是何原因，请再次回复，再次多谢！
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发表于 2012-11-3 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据经验，脾细胞一般不会分裂，但可以在体外培养相当长的时间，一般1星期是没有问题的；不知加conA目的是什么？凝集素能使糖蛋白发生凝集；脾细胞表面带大量糖蛋白（mIGg），一般会凝集的，能不能直接提RNA。
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发表于 2012-11-3 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为加conA后淋巴细胞转化，才有本人所需目的基因表达所以需要培养，表达目的基因
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