【求助】传代消化后细胞成团

最新回复

• glass (2012-11-08 12:26:35)

  用注射器吹打细胞悬液，21G1 1/2针头最好,勿用力太大,以免损伤细胞.

• 小荷尖尖 (2012-11-08 12:27:10)

  我觉得 一 可能是消化的时间可以稍微的延长一些。二 我觉得最主要是你的 细胞可能是长老了。所以就不好消化，消化起来是一团

• 8princess8 (2012-11-08 12:27:39)

  
  细胞在接种培养后有聚集倾向，这是很正常的，肝细胞就很明显的，但如果你是消化结束时接种就发现细胞有成团倾向，则说明你的细胞消化并不完全，还有很多组织纤维等存在。
  我的建议：
  
  1.细胞消化完全后，取悬液一滴镜下观察，细胞在显微镜下是清晰分散存在的，此时绝不会有团块出现，如果有，则证明消化不完全。此时建议你继续消化，达到满意效果。
  2.如上面所言，可以增加悬液吹打力度和时间，在接种过程中始终让同伴保持细胞悬液的吹打，这样可以防止细胞沉淀聚集，使样本均匀接种。

• moonlight45 (2012-11-08 12:28:10)

  增加胰酶的浓度可以改善吗？

• shenkunjie (2012-11-08 12:28:39)

  
  胰酶浓度可以增加，但是要注意消化过度，对细胞反而不好，你可以延长消化时间，或者把培养瓶放在３７度的培养箱内等一会儿，随时观察啦！消化过头的细胞生长不好，形态也要差一些！生长的细胞密度太大是，也容易消化成团的！

• whitesheep (2012-11-08 12:29:08)

  
  我觉得是你在消化过程中有部分细胞裂解所致。这是因为细胞裂解后会释放出DNA，DNA的粘度很高，从而使消化后的单细胞无法分散。我也曾遇到过这种情况，加入DNase 1后就可以解决这个问题。将组织剪碎至1-3mm3，加入每克组织4ml的0.25﹪胰蛋白酶酶溶液进行组织消化。再加入Dnase 1 至10μg/ml。置37℃孵化10-15分钟。筛网过滤，滤液进入一盛装10%体积胎牛血清（终止消化）的50 ml离心管中（置冰上进行）。残余组织以上述方法同样进行3次（共4次）。

• moonlight45 (2012-11-08 12:29:40)

  
  增加胰酶的浓度可以使细胞之间分离的更好？EDTA则使细胞从瓶壁上脱下来吗？

• glass (2012-11-08 12:30:21)

  
  我再次向大家推荐用注射器吹打细胞悬液，21G1 1/2针头最好,勿用力太大,以免损伤细胞. 一些细胞的生长特性就是容易成团，不吹打很难成单细胞悬液，增加胰酶 浓度或过分延长消化时间对细胞不好。上述方法我一直在用，我养的是LNCaP 细胞，极易成团。

• moonlight45 (2012-11-08 12:30:46)

  
  21G1 1/2针头是装在几ml的注射器上的呢？
  感激j510
  平滑肌细胞生长时就成团，可成多层生长

• glass (2012-11-08 12:31:14)

  
  3ml或5ml 都可以，注意消化完毕，勿使细胞悬液体积太大，<4ml 为宜，这样分散效果绝对有保障，可以试试。