【求助】做MTT时药物与MTT试剂发生反应该怎么办？

最新回复

• KGZ564 (2012-12-04 13:20:51)

  
  最近也在做mtt，不过就你提得问题，我给点意见，不知道能不能帮上忙？我想乳白色的药物浑浊液会对吸光度造成影响，不过可以在加MTT时，先把加药的培养液吸掉，然后用培养基和mtt加在一起，看网上有人这么说的，可以查查看。有人说在加DMSO前吸走液体会对结果造成影响，但是我用是另外一种法赞溶解液，不用吸弃培养液。孵育过夜第二天早上测就可以了。

• u234 (2012-12-04 13:21:18)

  做个药物对照组，看看药物组的OD值是不是很大

• tuuu2 (2012-12-04 13:21:38)

  网上看的总结是： 若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

• mimili_901 (2012-12-04 13:22:06)

  
  MTT就是会变色，并形成紫色针晶。
  你确定是药物和MTT反应吗？建议取点培养基，加入药物，然后加MTT，看看有没有紫色结晶，有才是有反应。如果证明有影响，加MTT前先吸弃含药上清，PBS洗1次，重新加培养基和MTT。
  药物乳白色混悬问题不大，只要均匀就行，当然能把浓度降到混悬不明显更好。
  如果你的紫色物质很疏松，一吸就掉，可能是细胞贴壁力比较差，可以考虑缩短时间。
  
  试过上述方法后，不行PM我。

• yychen (2012-12-04 13:22:32)

  
  对啊，我也很同意楼上的分析。你确定是药物和MTT发生的反应儿不是formazan?就按照shuangrenmu的建议先试试吧。另外我建议能不吸出含有药物的培养基最好别吸，本来MTT的误差就够大的了，再这么折腾你的结果估计就没法分析了，到时候SD会很大的

• TAT (2012-12-04 13:22:57)

  可以试试WST-1，不用吸掉液体，直接上酶标仪测OD值

• PCR (2012-12-04 13:26:11)

  的回答很好的解决了问题啊，首先确定药物是否具有还原MTT的能力，如果确定有，那在加MTT前，全部换液，换成干净的培养基，然后再加MTT，加MTT细胞差不多就都要死的，换液没影响。如果是悬浮细胞的话，那就要离心换液了。