【求助】请教分析凋亡结果！

最新回复

• eric930 (2013-1-07 16:09:36)

  
  下面的细胞没有分群啊，要么annexinv加多了，要么电压没调好。

• gmjghh (2013-1-07 16:09:57)

  
  感觉FITC的补偿调过了

• qumm1985 (2013-1-07 16:10:21)

  那么这个图片能不能用呢？得出的数据可靠吗？如果不能用，那么我怎么样改善条件呢？
  细胞Annixin和PI双染后等了两个小时才做，是不是影响较大？再次感谢！

• 阿司匹林 (2013-1-07 16:10:45)

  
  一般染15min就够了啊

• qumm1985 (2013-1-07 16:18:20)

  因为其他因素未能染色后一个小时内检测，wlnju战友能不能告诉我这个图能不能用？如果不能用应该怎么样改进？谢谢！

• gmjghh (2013-1-07 16:18:51)

  根本没分开
  
  建议多做几个
  
  分好坐标

• zsxan1990 (2013-1-07 16:19:29)

  
  能不能用？不能单从这一个图的结果下结论，可从以下几个方面考虑：
  1、首先要看你检测的结果可不可靠？把阴性对照、Annexin v/PI单染对照组的图上来看看，可对比看一下仪器参数设置（电压等）合不合理？
  2、补偿要根据Annexin v/PI单染来设置的，如果补偿设置合理，图是怎么样的没关系？
  3、你检测的细胞类型属于哪种？悬浮细胞？贴壁细胞？？有无经过胰酶消化处理？有些贴壁细胞的凋亡图没有明显分群特征的。

• wsll (2013-1-07 16:19:53)

  
  首先请问楼主是自己做的，还是找专业人士做的？
  
  双染测定凋亡的方法，
  （1）阴性对照，调电压；
  （2）PI， Annexin V单标调补偿；
  （3）上机测标本。
  
  需要注意的是，在第一步界定阴性时所采用的十字象限并不能区分Annexin V阴性和阳性群。也就是说，在完成第（1）、第（2）步时，上机测定标本时，annexin V在X轴会产生右移的现象，至于为什么，我还不太清楚，请高手指点。
  
  从你所提供的图片来看，存在两个问题：（1）补偿没有调好；（2）分群界定线不正确，实际上LL象限为活细胞，而真正早期凋亡细胞应该是LR象限很少的那部分（大约从10的2次方开始）。
  
  解决方法：（1）重复实验；（2）采用FlowJo脱机调补偿，重新划象限，分析数据。

• qumm1985 (2013-1-07 16:20:30)

  相关疾病：
  胃癌
  感谢各位战友热情帮助，完善一下具体实验过程，是这样的，是胃癌BGC823细胞，贴壁的。当时做的时候没做单染，所谓的电压补偿那我就更不懂了。0.25%胰酶消化后PBS洗一遍，联科AP试剂盒双染，细胞送到学校流式细胞室做的。我把对照的图发给大家看看吧！附图是没有处理的正常细胞。

  
  18862650.jpg

• qumm1985 (2013-1-07 16:20:47)

  
  阳性对照。

  
  84320994.jpg

• qumm1985 (2013-1-07 16:21:05)

  这张图不知道是什么意思。再次感谢高手指点！

  
  93813015.jpg

• H2O (2013-1-07 16:21:30)

  
  从最后一张图来看，细胞标本基本还是不错的，死细胞和粘连细胞不多，应该满足实验的要求。
  
  阳性对照和阴性对照不好说，看起来像是荧光补偿没有调好，但是也不绝对。一定要做单标补偿才能最终判断。
  
  阳性对照那张图不能那样分析的，就像前面我提到的，Annexin V轴上会发生漂移。具体我现在还不太懂流式，你可以直接找你们流式的老师问问就行了。
  
  或者你可以咨询alishang版主
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=15566071&sty=1&tpg=1&age=0')
  

• utt0989 (2013-1-07 16:22:08)

  
  最后一张图检测的是空白对照组细胞（即不加染料的细胞），是用来调节电压的和圈选目标群细胞的。
  做Annexin v/PI染色实验，你必须设置以下三个对照。
  1、空白对照，不加Annexin v/PI。用途如上所述。可用你的正常细胞（未经过凋亡因素处理的细胞）
  2、单标Annexin v对照。（用经凋亡因素处理的细胞）
  3、单标PI对照。（用经凋亡因素处理的细胞）
  -----2个单标对照用来调节荧光补偿。
  这是必须要做的，没有单标对照，无法调补偿，更没有依据设十字门。

• xingyi08 (2013-1-07 16:22:30)

  最后一张图检测的是空白对照组细胞（即不加染料的细胞），是用来调节电压的和圈选目标群细胞的。
  做Annexin v/PI染色实验，你必须设置以下三个对照。
  1、空白对照，不加Annexin v/PI。用途如上所述。可用你的正常细胞（未经过凋亡因素处理的细胞）
  2、单标Annexin v对照。（用经凋亡因素处理的细胞）
  3、单标PI对照。（用经凋亡因素处理的细胞）
  -----2个单标对照用来调节荧光补偿。
  这是必须要做的，没有单标对照，无法调补偿，更没有依据设十字门。
  
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  最后一个图应该是用软件分析时选门的时候。

• zsxan1990 (2013-1-07 16:23:10)

  我做的时候流式老师也没让我设2个单染，只用一个阴性对照就完成了门控和补偿。不知对不对？