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标题:【求助】养过原代上皮细胞的大神

wood533[使用道具]
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发表于 2013-1-8 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】养过原代上皮细胞的大神


最近正在养小鼠原代上皮细胞，养了一段时间后发现细胞内出现了很多空泡，整个细胞看起来像是蜂窝状，请教各位大神这是怎么回事呢？谢谢~~~
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-1-8 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞长得比较慢，分布也不太均匀，有一孔没有传代，只是原位消化了一下，另一孔传了第一代，照片没拍，显微镜不太好，看的很不清楚
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发表于 2013-1-8 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

老化细胞容易出现空泡
第一次传代就出现，检查一下培养基有没有问题？PH对不对？拿你的培养基试试别的细胞
或者消化的时间是不是太长？内皮细胞很娇的~
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发表于 2013-1-8 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
老化细胞容易出现空泡
第一次传代就出现，检查一下培养基有没有问题？PH对不对？拿你的培养基试试别的细胞
或者消化的时间是不是太长？内皮细胞很娇的~

============================================================================================================

我养的是上皮不是内皮，现在用的是BEGM，专门用来培养上皮细胞的，估计别的细胞养不活吧。消化的话时间是挺长的，一共消化了十几分钟，而且一部分细胞掉下来较早，还有一部分却要等好久，我都是分批收集起来离心再重悬的。唉，最近不知道怎么了，连第一批细胞都长不起来了，但是步骤跟材料都是一样的，郁闷……
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发表于 2013-1-8 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
额，看错看错~
消化十几分钟是有点长啊，原代细胞因为状态不一致，所以我们多采用多步消化法
加胰酶，看见一部分细胞变圆（不要全部都变圆）以后，加血清终止，然后吹打，吸出转到离心管中。如果有还有细胞贴壁，加PBS清洗2次，再加胰酶消化，如此重复，把几次消化下来的细胞集中再种到瓶子里去
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发表于 2013-1-8 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ending 于 2013-1-8 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
额，看错看错~
消化十几分钟是有点长啊，原代细胞因为状态不一致，所以我们多采用多步消化法
加胰酶，看见一部分细胞变圆（不要全部都变圆）以后，加血清终止，然后吹打，吸出转到离心管中。如果有还有细胞贴壁，加PBS清洗2次，再加胰酶消 ...

你养的也是原代吗？
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发表于 2013-1-8 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内皮和平滑肌
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发表于 2013-1-8 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的是原代上皮细胞，用的和你的培养基差不多，PrEGM，你用的是胶原蛋白酶还是胰酶啊？
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发表于 2013-1-8 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的是原代上皮细胞，用的和你的培养基差不多，PrEGM，你用的是胶原蛋白酶还是胰酶啊？

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我用的是链酶蛋白酶，你养的好么？
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发表于 2013-1-8 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是Ι型胶原酶，0.1%，这个是最温和的消化酶了，对上皮来说比较合适，你的消化酶我没用过，是不是消化的过了？
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