【求助】western blotting如何从组织提蛋白，求详细步骤

最新回复

• tangxin_80 (2013-4-06 15:09:39)

  买RIPA裂解液，可以用碧云天的，再买几个玻璃匀浆器，匀浆后离心吸取上清，测蛋白浓度，上样可以直接作为WB裂解液

• jingling845 (2013-4-06 15:10:17)

  QUOTE:

  原帖由 tangxin_80 于 2013-4-6 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  买RIPA裂解液，可以用碧云天的，再买几个玻璃匀浆器，匀浆后离心吸取上清，测蛋白浓度，上样可以直接作为WB裂解液

  裂解液用原先我提细胞蛋白的就行吗

• tangxin_80 (2013-4-06 15:10:42)

  QUOTE:

  原帖由 jingling845 于 2013-4-6 15:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  裂解液用原先我提细胞蛋白的就行吗

  你应该有说明书吧？一般买的裂解液都能从细胞或组织提取蛋白的

• jingling845 (2013-4-06 15:11:39)

  好的，需要用匀浆缓冲液吗

• tangxin_80 (2013-4-06 15:12:19)

  QUOTE:

  原帖由 jingling845 于 2013-4-6 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  好的，需要用匀浆缓冲液吗

  不需要，，，给你举个例吧：剪取0.1g组织，加入RIPA裂解液（含PMSF，蛋白酶等）1ml，转移至玻璃匀浆器，冰上匀浆至组织块消失，注意低温，，，然后就是离心了

• jingling845 (2013-4-06 15:38:20)

  不需要，，，给你举个例吧：剪取0.1g组织，加入RIPA裂解液（含PMSF，蛋白酶等）1ml，转移至玻璃匀浆器，冰上匀浆至组织块消失，注意低温，，，然后就是离心了
  
  ==========================================================================
  
  组织的重量怎么控制，要称重吗，还有离心取上清，测浓度，加上样缓冲液煮沸就能用了是吧

• tangxin_80 (2013-4-06 15:52:11)

  QUOTE:

  原帖由 jingling845 于 2013-4-6 15:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不需要，，，给你举个例吧：剪取0.1g组织，加入RIPA裂解液（含PMSF，蛋白酶等）1ml，转移至玻璃匀浆器，冰上匀浆至组织块消失，注意低温，，，然后就是离心了
  
  ==========================================================================
  
  组 ...

  用电子天平称重，，，对，先测浓度再加上样缓冲液处理

• tangxin_80 (2013-4-06 15:52:35)

  玻璃匀浆器就是长这样的

  
  39736765.jpg

• jingling845 (2013-4-06 15:53:05)

  
  我的组织是从液氮里拿出来的，我怕不好称

• jingling845 (2013-4-06 15:53:50)

  
  我昨天提了一次，组织从液氮里拿出来一会会就软了，然后裂解液又加多了，匀浆器不是玻璃的，是像枪一样的很重的一把，蛋白浓度不好，只有19，今天加样加了30微升，但内参只加了5微升，它会不会跑电泳的时候跑向内参那边，因为太过头重脚轻了

• tangxin_80 (2013-4-06 15:54:14)

  我的组织是从液氮里拿出来的，我怕不好称
  
  ===================================================================
  
  组织块没必要放液氮里的，直接放-80度冰箱就行了，就算用来提RNA都是没问题的