【求助】原核基因在PET32a中表达时要去除信号肽吗？

最新回复

• duoduo (2013-4-19 12:48:06)

  
  一定要切除，我看了好多的文献，都是这么做的。

• flyxx05 (2013-4-19 12:48:55)

  QUOTE:

  原帖由 duoduo 于 2013-4-19 12:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  一定要切除，我看了好多的文献，都是这么做的。

  是原核基因也一定要切除吗？

• u234 (2013-4-19 12:49:18)

  QUOTE:

  原帖由 flyxx05 于 2013-4-19 12:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我有一段原核基因，前面有信号肽序列，在构建表达载体时没有去除信号肽，载体是PET32a，这样会不会对表达有影响？谢谢

  一定要切除!

• wsll (2013-4-19 12:49:45)

  
  原来我刚做试验时也遇到这个问题。后来是把信号肽去掉的，因为成熟的蛋白质是没有信号肽的，现在表达了好几个蛋白了，都很好。

• zwsyrt (2013-4-19 12:50:13)

  
  不知道你表达来干嘛的。如果做功能要有活性的蛋白，要切除。如果只是做抗体，带信号肽也是无所谓的，也是可以表达出来的。

• flyxx05 (2013-4-19 12:50:41)

  
  谢谢各位哈!
  我想问一下,如果断点在26与27肽键之间的话,应该怎么祛除啊?

• flyxx05 (2013-4-19 12:50:57)

  
  是不是祛除了之后就一定能表达出有活性的蛋白质 ?

• nn255 (2013-4-19 12:51:21)

  
  你就设计引物，扩27后面得。然后在前面加个atg就好了。一般来说你最好获得可溶性表达，是有很大机会获得有活性得蛋白得。

• flyxx05 (2013-4-19 12:51:48)

  
  谢谢你!
  能不能推荐一下哪些原核表达载体可获得可溶性的表达?PET32a可以吗?
  非常感谢!

• birdfish (2013-4-19 12:52:10)

  
  一定要切 从27开始加ATG表达

• 鹅鹅鹅 (2013-4-19 12:52:34)

  
  pGex系列质粒一般是分泌表达，不过我那个不是，55。

• any333 (2013-4-19 12:52:56)

  
  要加ATG吗? pET32上面本身就带了一个Trx蛋白的序列,其中不是有atg的吗

• purrr (2013-4-19 12:53:24)

  
  直接用载体上的ATG不行吗？