【求助】ERK western出现上面那条带很浅...

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-4-27 16:16 作者: seven7 来源: 分析测试百科网

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【求助】ERK western出现上面那条带很浅...

请问大家，我今天做western，ERK1/2的两条带上面的特别浅(看不出来)，下面的深（基本正常），形状正常，乍一看像是只有一条带，不知道是什么原因，以前做的都挺好的，今天不知道怎么了，想求助做过的朋友。。。。。谢谢！！

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wmp1234 (2013-4-27 16:16:18)

请问，你之前怎么跑出来的两条带？用的是什么一抗呢？我为什么只跑出了一条带，而且磷酸化的跑不出带来呢？多谢多谢，急用哇！
seven7 (2013-4-27 16:16:40)

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请问，你之前怎么跑出来的两条带？用的是什么一抗呢？我为什么只跑出了一条带，而且磷酸化的跑不出带来呢？多谢多谢，急用哇！
我用的CST的抗体，两个都是，很好，实验已经做完了，你做的哪方面的实验？
bs4665 (2013-4-27 16:17:09)

磷酸化的封闭液你用的是脱脂奶粉吗？
seven7 (2013-4-27 16:17:27)

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原帖由 bs4665 于 2013-4-27 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

磷酸化的封闭液你用的是脱脂奶粉吗？
不是，我们实验室有个师兄用脱脂奶粉也能做出来，不过我用的5% BSA（索莱宝的粉末就行）
bs4665 (2013-4-27 16:17:49)

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不是，我们实验室有个师兄用脱脂奶粉也能做出来，不过我用的5% BSA（索莱宝的粉末就行）
已经做出来了，是提取蛋白的时间不对了，跟封闭液没有关系，多谢
wsll (2013-4-27 16:18:13)

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原帖由 bs4665 于 2013-4-27 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

已经做出来了，是提取蛋白的时间不对了，跟封闭液没有关系，多谢
你好，如果你养的是细胞的话，请问提取蛋白的时间大概是什么时间段呢？加药后几个小时？
seven7 (2013-4-27 16:18:37)

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原帖由 wsll 于 2013-4-27 16:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

你好，如果你养的是细胞的话，请问提取蛋白的时间大概是什么时间段呢？加药后几个小时？
这个你应该看看你的文献，参考这个，每个实验都不一样的
wsll (2013-4-27 16:18:59)

我看了文献收集细胞的时间有5.15.30分钟，也有12.24.48小时的。。。。就不知所措
seven7 (2013-4-27 16:19:21)

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原帖由 wsll 于 2013-4-27 16:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
我看了文献收集细胞的时间有5.15.30分钟，也有12.24.48小时的。。。。就不知所措
实在不行你就都试试，看看哪个取得好