【求助】sds-page胶蛋白回收

最新回复

• birdfish (2013-5-02 16:46:50)

  QUOTE:

  原帖由 pencil菲 于 2013-5-2 16:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  请各位大虾赐教sds-page胶中蛋白回收的方法。

  PVDF膜转膜！

• lixi559 (2013-5-02 16:47:09)

  
  电泳后不要染色，将胶条切下，用buffer浸泡就可以将蛋白溶出来了

• pencil菲 (2013-5-02 16:47:48)

  QUOTE:

  原帖由 lixi559 于 2013-5-2 16:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  电泳后不要染色，将胶条切下，用buffer浸泡就可以将蛋白溶出来了

  请问用是什么buffer呢？还有怎样确定目的条带呢？

• any333 (2013-5-02 16:48:17)

  
  Zn染，切条带

• langlang (2013-5-02 16:48:38)

  
  电泳结束后将胶切下，首先用预冷的双蒸水洗胶，其次用预冷的0.25M的氯化钾浸泡胶2-5min，看到有蛋白的地方会有白色条带，确定目的蛋白的位置并切下，再次是将切下的胶条放入预先用电泳缓冲液润洗过的透析袋内，加入适当的电泳缓冲液密闭透析袋，最后是衡流100mA 2h，结束之前将电极反接15s效果更好。做过几次都还好。预祝成功！

• bamboo16 (2013-5-02 16:49:06)

  楼上有点麻烦了，如果仅仅是回收蛋白的话，直接放入透析管（透析袋大了点），置于电泳缓冲液中加入电场中，带有负电的蛋白可以轻易的从胶中释放出来，离心后收集上清即可。
  默克的透析管可以推荐使用，煞是方便。

  
  14258649.jpg

• fei1226com (2013-5-02 16:49:54)

  
  电泳结束后将胶切下，首先用预冷的双蒸水洗胶，其次用预冷的0.25M的氯化钾浸泡胶2-5min，看到有蛋白的地方会有白色条带，确定目的蛋白的位置并切下.做完这一步之后不用电洗脱的方法，还有其他方法可以把蛋白溶出来吗？

• guagua (2013-5-02 16:51:16)

  可以使用以下上海生工生产的试剂盒.
  
  PAGE胶蛋白微量回收试剂盒
  Micro Protein PAGE Recovery Kit
  产品说明：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等，本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法,本产品适用于从考染（SK3011），铜染（BSP017）或锌染（BSP019）中回收蛋白质，回收效率在50-80%,能够使用20次。Store: 2～8℃
  产品特点:
  1. 简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）;
  2. 适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶;
  3. 回收率一般在50-80%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）;
  4. 跟后续的实验兼容，包括2-D电泳、质谱测序等。
  编号 包装 价格 产地
  BSP062 20 preps 360 生工

• bling (2013-5-02 16:51:40)

  你回收蛋白的目的是什么

• 969 (2013-5-02 16:52:03)

  最佳方法是电洗脱
  
  也可以把胶切下来捣碎，用超声轻微的协助一下，或者液氮研磨
  
  因为page是不溶于水的，所以只能是物理性提取，效果无法和DNA相比
  
  如果你是做抗体，无需回收，直接切胶液氮研磨就可以打兔子了

• 911 (2013-5-02 16:52:22)

  
  最后用于测序，是不就用转膜的方法比较好？

• 婴儿脸 (2013-5-02 16:52:42)

  我想问一下，SDS-PAGE蛋白且胶回收后，直接研磨就可以吗？怎么去测蛋白浓度，去免疫兔子？

• 00无名指00 (2013-5-02 16:53:07)

  最佳方法是电洗脱
  
  也可以把胶切下来捣碎，用超声轻微的协助一下，或者液氮研磨
  
  因为page是不溶于水的，所以只能是物理性提取，效果无法和DNA相比
  
  如果你是做抗体，无需回收，直接切胶液氮研磨就可以打兔子了
  
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  您好，我是要做抗体，请问直接将所需要的片段切胶液氮研磨就可以了么？

• ffooll (2013-5-02 16:53:35)

  可以使用以下上海生工生产的试剂盒.
  
  PAGE胶蛋白微量回收试剂盒
  Micro Protein PAGE Recovery Kit
  产品说明：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等，本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法,本产品适用于从考染（SK3011），铜染（BSP017）或锌染（BSP019）中回收蛋白质，回收效率在50-80%,能够使用20次。Store: 2～8℃
  产品特点:
  1. 简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）;
  2. 适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶;
  3. 回收率一般在50-80%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）;
  4. 跟后续的实验兼容，包括2-D电泳、质谱测序等。
  编号 包装 价格 产地
  BSP062 20 preps 360 生工
  
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  你好 老师 问一下 我的蛋白是包涵体复性以后 要求有活性 用这个试剂盒 对蛋白活性有影响吗？