【求助】聚丙烯酰胺凝胶电泳时胶不凝，找不到原因？

最新回复

• youyou99 (2013-5-07 18:08:01)

  
  小锯齿是因为你的凝固时间太长了，导致封胶夜和胶溶液混溶。
  
  TEMED AP 用原倍的或加倍剂量，上胶后同时要避风，用酒精封，有条件最好30度放置30min，，应该可以解决

• tudou85 (2013-5-07 18:08:24)

  感觉像是AP的问题 是不是AP的用量少了 0.1g溶1mLddH2O 还有AP的保存是不是有问题 导致纯度不够了？
  另外 现在室温较低 配10mL的分离胶用TEMED 6μL 比较好 半小时左右能凝
  实在不行就重新买个凝胶的试剂盒
  预祝成功~

• fsdd817 (2013-5-07 18:08:45)

  
  买一瓶新的AP吧，说不定你原来的已经氧化掉了

• ROSE李 (2013-5-07 18:09:03)

  
  我觉得AP买的新的也不一定会有什么问题，TEMED的质量也有很大的问题。我之前用过BBI的一瓶，新买的，18块钱。但是凝2个小时就小拇指那么大一点点不到的凝了。用Amresco的凝半个小时就看见界面了。温度都是差不多的，在20多度的时候。

• 66+77 (2013-5-07 18:09:26)

  呵呵，大家做胶开始出问题了~~
  最主要的原因是，天气开始降温了，我们实验室做胶的ap用量明显上去了，呵呵，别担心。如果想快点，可以做好后放温箱里，ap可以正常用量：）

• loli (2013-5-07 18:09:45)

  我们实验室也遇过这种问题，是AP的原因，可以先借别人家的试一下，如果是AP的原因就再买一点吧，因为这样做胶真的很费时间，我们买的新的AP，很好用，十几分钟就好了！祝成功

• www.1 (2013-5-07 18:10:04)

  上胶后同时要用正丁醇封以免有锯齿，
  试剂质量要是没问题，提高温度应该可以。

• IAM007 (2013-5-07 18:10:23)

  你的AP变质了,要重新买过.重新配过之后凝固时间就会和以前一样.注意AP的保存,避免氧化,不然你的胶又凝固不了了.凝固时间正常后就不会有小锯齿出现了.

• moonlight45 (2013-5-07 18:10:42)

  过硫酸铵[（NH4）2S2O8]产生出游离氧原子使单体成为具有游离基的状态，从而发生聚合作用。一般来讲，温度过低，有氧分子或不纯物质存在时都能延缓凝胶的聚合。TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。有可能是这两个中间一个或者都有问题。你看看TEMED外观有没有变化，正常应该是透明或微黄。我正遇到这样的问题，准备重新购买AP，TEMED。

• @STAR@ (2013-5-07 18:11:04)

  
  我的经验是AP坏了。
  
  把瓶子里表面的AP扔掉。
  
  取里面的AP再配。

• qianqin1977 (2013-5-07 18:11:21)

  
  天气凉了，实验室来暖气之前我的胶下缘出线锯齿，后来把AP和TEMED都加倍了，发现胶凝的快了之后锯齿就消失了。所以我想应该还是AP活TEMED的问题。还有，我用的是水饱和的正丁醇封的胶。

• 831226 (2013-5-07 18:11:45)

  
  AP有问题，我以前也出现过类似的问题

• shenkunjie (2013-5-07 18:12:13)

  
  我的实验也是类似的情况，不凝，一般都要过夜还等很长时间，TEMED换的是新的，新的应该不会出问题，关键胶也跑得不好，像这样有图<A href="http://atgc.dxy.cn/bbs/topic/20192041">http://atgc.dxy.cn/bbs/topic/20192041</A>
  
  准确的说应该是有拖尾，也帮我找找原因吧，我怀疑是温度低了，20度左右，这几天下雨

• yysr238 (2013-5-07 18:12:36)

  
  你将配好的胶取1ML到离心管，放在50度的水浴，看是不是能凝固，如果能凝，说明你的胶本身没有问题。我之前冬天做也很难凝固。现在都这么做：配的胶在加aps和TEMED之前先加转子在涡旋仪上充分溶解混匀，同时加热，温度大概40多吧，然后快速加入10%APS和TEMED，快速倒胶，否则就凝了。希望对碰见问题的同行们有帮助！
  不过我跑的SSR胶有很多非特异条带，不知道什么原因