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【求助】TCA丙酮沉淀法

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-5-08 13:48    作者: plaa    来源: 分析测试百科网

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【求助】TCA丙酮沉淀法

各位前辈，请教大家关于TCA丙酮沉淀蛋白的方法。
1 直接100%TCA沉淀，使终浓度到达10%。离心，用预冷丙酮悬浮清洗。裂解液裂解。

2 10%TCA丙酮溶液沉淀。离心，用80%丙酮，100%丙酮清洗个三次。裂解液裂解。

我不太明白，这个2中TCA的丙酮溶液，和仅有TCA的溶液沉淀效果有什么不一样。
在沉淀过程中，TCA是沉淀蛋白的作用，丙酮是清洗TCA的作用，是这样么？可是第2种方法10%TCA丙酮溶液中丙酮是什么作用啊？
我是双向电泳的新手，进展缓慢啊。谢谢各位指教。
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  • one (2013-5-08 13:49:13)


    蛋白不溶于10%TCA的溶液，也不溶于丙酮、甲醇乙醇等有机溶剂，在实验操作过程中，TCA可以用水溶，也可以用丙酮溶解，但一般情况而言10%TCA的水溶液往往是用于沉淀液体中的蛋白的，比如菌体培养液中的胞外分泌蛋白，而10%TCA的丙酮溶液往往是用于沉淀固体中的蛋白的，比如植物叶片液氮磨碎后的粉末，另外，由于TCA是极酸性物质，如果有残留的话会影响到后面的等电聚焦等过程，所以不管是10%TCA的水溶液还是10%TCA的丙酮溶液沉淀完之后，都必须再用单纯的丙酮溶液（有时也用80%的丙酮溶液）再清洗沉淀两至三遍，使得原来的TCA被充分洗去，另外，由于丙酮有极强的挥发性，所以干得也比较快，不会残留，期望以上解释对你有用！祝你好运，朋友！

  • plaa (2013-5-08 13:49:38)

    QUOTE:

    原帖由 one 于 2013-5-8 13:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    蛋白不溶于10%TCA的溶液，也不溶于丙酮、甲醇乙醇等有机溶剂，在实验操作过程中，TCA可以用水溶，也可以用丙酮溶解，但一般情况而言10%TCA的水溶液往往是用于沉淀液体中的蛋白的，比如菌体培养液中的胞外分泌蛋白，而10%TCA的丙酮 ...
    谢谢谢谢~~呵呵，懂得了。我是先裂解之后再沉淀纯化，所以是溶液的沉淀，用100%就可以。
    那加0.2%DTT可以直接加在100%TCA里么？还是现用现加？

  • one (2013-5-08 13:50:04)

    QUOTE:

    原帖由 plaa 于 2013-5-8 13:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')


    谢谢谢谢~~呵呵，懂得了。我是先裂解之后再沉淀纯化，所以是溶液的沉淀，用100%就可以。
    那加0.2%DTT可以直接加在100%TCA里么？还是现用现加？
    不错，很聪明，夸奖一下，一说就懂了，呵呵！DTT容易失效，一般都是现用现加的

  • xue258 (2013-5-08 13:50:35)

    QUOTE:

    原帖由 one 于 2013-5-8 13:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')



    不错，很聪明，夸奖一下，一说就懂了，呵呵！DTT容易失效，一般都是现用现加的
    丙酮中加DDT效果是什么，不加也没什么大碍吧？

  • ha111 (2013-5-08 13:50:56)


    我一直是加纯的丙酮，最后浓度是80%,过夜后，在用80%丙酮清洗，弄干。

  • youyou99 (2013-5-08 13:51:19)


    请教一下各位前辈，为什么提取植物蛋白用TCA丙酮沉淀比用丙酮沉淀的效果要好呢？
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