【求助】Ni柱纯化后蛋白易沉淀

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-5-10 17:46 作者: dreaming 来源: 分析测试百科网

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最近遇到很头疼的问题：带His tag的融合蛋白用Ni柱纯化，咪唑洗脱，但样品放在-20度就产生大量沉淀，放在4度就没问题。如果先置换buffer 到PBS，则4度和-20度都容易沉淀。请教高手，有遇到此问题的吗？是咪唑惹的祸吗？

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【求助】Ni柱纯化后蛋白易沉淀

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qqq111 (2013-5-10 17:47:31)

据我经验应该不会。我做活性蛋白，都是纯化后用microcon浓缩兼除盐，因为咪唑会影响活性。不知您的蛋白是做哪方面用途？
ending (2013-5-10 17:47:48)

没问题吧，溶解不就行了吗？
2541 (2013-5-10 17:48:13)

QUOTE:
原帖由 ending 于 2013-5-10 17:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

没问题吧，溶解不就行了吗？
不好说，那就先别换到PBS。
另外，-20不是好的选择，因为含盐的溶液-20是冻不住的，很容易变性，可以考虑加50%甘油。
或者，干脆-80C保存。另外，蛋白浓度可以适当稀释，够用就好。
可以加5% 蔗糖，一般都会有明显的好转
dream2013 (2013-5-10 17:48:35)

谢谢！
加甘油以后无法冷冻干燥，我的蛋白最终要冻干。
加蔗糖还没试过，加蔗糖会影响冻干吗？
moonlight45 (2013-5-10 17:48:52)

我的蛋白也是一样的情况，也正烦恼，但是加了甘油在用的时候需要再次透析，可以试一下-80度，看效果怎样，请教一下各位高手，出现这样的原因试什么啊？另外加蔗糖有什么影响，比如免疫或者做交联？
2541 (2013-5-10 17:49:08)

蔗糖是常用的冻干赋形剂，会对冻干有好处。
mysmdbl (2013-5-10 17:49:28)

先确定两点：一是你的目的蛋白基因来源是哪里？二是你你沉淀的蛋白再次溶解需要什么样的条件？高盐是否能溶解？
dragonkilly (2013-5-10 17:50:01)

请问加入这些东西以后是在什么条件下保存？在透析除盐的过程中，蛋白易沉淀，加入DTT后蛋白又会溶解，不知道你碰到过这样的情况没有？
fox_79 (2013-5-10 17:50:22)

1.你置换的缓冲液把PH提高点，盐离子降低或去掉。
2.你的蛋白在保存中，可以加点非离子型表面活性剂，如甘油等。
3N4G (2013-5-10 17:50:41)

直接加盐如Nacl1-2M可以，其实是由于咪唑的原因，去了就没这问题。