【求助】提的蛋白中出现沉淀

最新回复

• 987789 (2013-5-11 12:58:00)

  
  蛋白变性了吧！有些缓冲液在结冰状态下pH值回改变的！特别的磷酸缓冲液。

• dongdongqiang (2013-5-11 12:58:22)

  
  手指弹一弹,就混匀了....

• fsdd817 (2013-5-11 12:58:50)

  蛋白变性了吧！

• u76mp (2013-5-11 12:59:28)

  QUOTE:

  原帖由 fsdd817 于 2013-5-11 12:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  蛋白变性了吧！

  这样的话，还能做WB么？

• u76mp (2013-5-11 13:00:22)

  
  今天离心了一下，取了上清测了一下，蛋白浓度很低，不知能否做WB，恳请高手指教

• shenkunjie (2013-5-11 13:00:41)

  
  是不是用的磷酸缓冲液啊？并且浓度比较高的，磷酸缓冲液在结冰时pH会有变化的，蛋白可能变性哦。

• wawa (2013-5-11 13:01:03)

  我用尿素溶解包涵体后纯化的蛋白也出现过这样的情况，并且等溶解后离心还是有少量沉淀。不知为什么？

• c86v (2013-5-11 13:01:26)

  我也是的，提的蛋白在－70放了一个晚上就有沉淀了，弹了也还是不溶。OD下降了很多，怎么搞呢

• mimili_901 (2013-5-11 13:01:47)

  
  加热一下，再自然冷却试试

• u76mp (2013-5-11 13:02:18)

  
  我的也是啊也不是沉淀就是想胶冻样的东西在那里，不知道什么原因

• bring (2013-5-11 13:02:36)

  
  我的也出现了类似的情况，做出来的wb结果显色颜色很淡，不知道怎么解决。

• ladyhuahua (2013-5-11 13:02:59)

  
  单去污裂解液提蛋白的效果是很不好的，我做了n次，失败了n次，后来换了提蛋白的方法，再做Western，才出了条带。楼主换方法提蛋白吧。

• qqq111 (2013-5-11 13:03:29)

  我现在也遇到了楼主描述的类似问题 请问最后大家都是怎么解决的呢？