【求助】IPTG诱导前后蛋白表达量都一样，奇怪啊

最新回复

• dongdongqiang (2013-5-13 15:08:09)

  你能确定你看到的是目的条带吗？即便验证正确，测序正确，也不一定能表达的。
  如果你确定那是你的目标蛋白，你最好做个WB验证一下。

• hustwb (2013-5-13 15:08:27)

  
  是不表达把，还是北京太深，培养基里面加点葡糖糖试试看有没有表达

• gogo (2013-5-13 15:08:51)

  很有可能是本底表达,可培养基中加葡萄糖,就可抑制本底啊;

• uuooii (2013-5-13 15:10:23)

  
  多谢上面高手指点,我确定那个是我的目的蛋白,而且表达量还超高,WESTERN-BLOT也有,我想问的是,在培养基里加葡萄糖加多少量最合适呢?我要是摇一升的菌液,加多少呢? 小弟在这谢谢各位了!!

• uuooii (2013-5-13 15:10:42)

  小弟还想不明白,为什么要加葡萄糖呢? 葡萄糖在这里起什么作用呢? THANKS!

• fei1226com (2013-5-13 15:11:36)

  
  我也遇到你同样的问题，也是用不清楚了，但是加葡萄糖是因为你的用的质粒是PET系列的带有应该含有乳糖操纵子，加了葡萄糖就会抑制本题表达。你可以看看关于操纵子方面的书。
  搂住不知道你现在你遇到的问题解觉了么？如见解决请把你的解决方法告诉我，谢谢你了

• fei1226com (2013-5-13 15:12:05)

  
  1%的量加就行吧

• ha111 (2013-5-13 15:12:26)

  
  请问一下，我们是要蛋白的，有本底表达又如何？只要我们要的蛋白出来不就行了？为什么大家都在问怎么去除本底表达呢？