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【求助】丙酮沉淀蛋白除盐

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-5-13 15:13    作者: veiwu    来源: 分析测试百科网

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【求助】丙酮沉淀蛋白除盐
我是新手，请多帮助
我 是 做2－D，目前提取地细胞蛋白混有盐分，拟采用丙酮沉淀法去除，
那位大侠做过，请给予指导需要采取怎么步骤。
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最新回复

  • zranqi_1 (2013-5-13 15:13:46)


    为何偏要用丙酮沉淀法，G25应该可以用来脱盐啊！

  • fei1226com (2013-5-13 15:14:05)


    冷丙酮沉淀法步骤见这篇review的样品制备。
    冷丙酮沉淀法确实可以除盐，还可以去色素，脂，使蛋白彻底变性。但是会使一些蛋白丢失。可以先做个预试验看看，再决定是否用该法。

  • fei1226com (2013-5-13 15:14:26)

    对了，你用过冷丙酮沉淀，具体步骤是什么呀？

  • mamamiya (2013-5-13 15:15:14)


    也可以用10％TCA的丙酮溶液，这样可以更好的去除盐、脂等内源性小分子物质，而且还可以起到浓缩的作用。具体做法：加3倍样品体积冷的10％TCA的丙酮溶液，－20度沉淀4hr以上，离心去上清，再加100％冷丙酮，－20度沉淀4hr以上，离心去上清，再加80％冷丙酮，－20度沉淀2hr，离心取沉淀，真空干燥。

  • veiwu (2013-5-13 15:15:38)

    用丙酮沉淀后的蛋白用来做蛋白质组,怎么加上样缓冲液,需要加DTT吗
    关键上样缓冲液不可反复冻融,是不是加入上样缓冲液后不能再保存蛋白了,需要直接使用吗

  • glass (2013-5-13 15:16:03)


    用超滤。。。

  • ukonptp (2013-5-13 15:16:31)


    丙酮沉淀后的样品，冻干。
    之后再用裂解液裂解之后跑二向，里面有DTT

  • qianqin1977 (2013-5-13 15:16:52)

    偶的样品也用TCA沉淀过，但样品聚焦不了～就连再水化前加入溴芬兰做指示剂时颜色都与平时不同，是黄的，不晓得能否也将那篇review发给我

  • xyw5 (2013-5-13 15:17:16)

    黄颜色是因为你没有把TCA清洗干净，溴芬兰在酸性条件下显黄色

  • qianqin1977 (2013-5-13 15:17:46)

    QUOTE:

    原帖由 xyw5 于 2013-5-13 15:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    黄颜色是因为你没有把TCA清洗干净，溴芬兰在酸性条件下显黄色
    原来如此，这么说来TCA未洗干净肯定也会到影响到聚焦了！？赶紧再试试～多谢了！

  • am10 (2013-5-13 15:18:21)

    我也在做大肠杆菌总蛋白提取作为质谱的质量控制，想用丙酮沉淀法
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