【求助】请教蛋白质纯化

最新回复

• utt0989 (2013-5-18 10:20:13)

  这要视具体情况而定，看你对蛋白质的纯度要求如何。如果只是测定蛋白质的活性，有时候不用纯化也可以用上清直接进行，如果作为免疫原诱导抗体，则80%以上基本可以用，如果是要申报新药，则要求蛋白量在5ug（银染）或10ug（R250 ）时SDS-PAGE是一条带，另外，还可以用薄层扫描或者HPLC进行纯度鉴定。

• loli (2013-5-18 10:20:46)

  
  cuturl('http://www.bioon.com/tils/2/2-9.pdf')
  去看看吧，我觉得挺全，虽然我看不懂~~~英文差

• wsll (2013-5-18 10:21:25)

  不过你能对我的问题做具体回答吗？
  原核表达GST-protein后，经GST-Sepharose过柱纯化，然后予Xa因子切除担体GST后，进一步采用什么方法纯化？是不是再次过柱？
  谢过！

• dongdongqiang (2013-5-18 10:22:35)

  
  需要再次过柱，但过柱前酶切蛋白需要透析并和你的上样缓冲要保持一致。亲合GST后，会流下你的目的蛋白。

• qqq111 (2013-5-18 10:23:14)

  在过疏水柱前是不是不需要将蛋白样品透析，只是在上离子柱之前才要降低其电导率，那在过分子筛前要不要透析呢？刚进实验室，很简单的问题，谢谢！

• yes4 (2013-5-18 10:23:31)

  在过疏水柱前是不是不需要将蛋白样品透析，只是在上离子柱之前才要降低其电导率，那在过分子筛前要不要透析呢？刚进实验室，很简单的问题，谢谢！

• yes4 (2013-5-18 10:24:50)

  在过疏水柱和分子筛前均没必要透析。

• vivian4123 (2013-5-18 10:25:42)

  经过切割后，进一步用GST柱子进行纯化，目的蛋白会从透过峰里面出来，结合在上面的是未切割完的目的蛋白,在用苯甲眯-sepharose柱出去Xa，最后用凝胶柱除去二聚体

• IAM007 (2013-5-18 10:26:08)

  最简单的就是再次过GST柱纯化，标签被吸附，你的目的蛋白流出，这是最好不过的方法了。

• wood533 (2013-5-18 10:27:46)

  原核表达GST-protein后，经GST-Sepharose过柱纯化，然后予Xa因子切除担体GST后，进一步采用什么方法纯化？是不是再次过柱？纯化后蛋白纯度如何测定？
  
  谢！
  
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  你是指切除单体GST后你的样品处理吗？应该样品还含有Xa因子没有去除，部分没有切除GST的带标签的蛋白。因为Xa因子是丝氨酸蛋白酶，所以可以使用苯甲醚的亲和层析柱去除Xa因子，然后再过一次GST-Sepharose，可以把含标签的蛋白去除