【求助】BDNF的western 条带都连成一片

最新回复

• finger (2013-5-18 17:52:22)

  
  另外上样量只有10μg

• wmp1234 (2013-5-18 17:52:56)

  楼主的标本是细胞还是动物组织，我也刚好在做BDNF，标本是豚鼠的脑组织，买的是abcam公司的产品。不过貌似没有出现你说的这种情况。你的一、二抗稀释比例如何，哪个公司的产品？条带是多少？

• zhezhe (2013-5-18 17:53:47)

  
  可以试试做个一抗的浓度梯度，另外电泳的时候注意降温，转膜的时候夹紧点，多用层滤纸，转膜也注意降温，

• finger (2013-5-18 17:54:26)

  表示最后做出来了
  分享下条件
  80v~120v跑到溴酚蓝到分离胶中间
  湿转250mA 1H
  封闭1h
  一抗过夜 二抗1h

• vivian4123 (2013-5-18 17:55:39)

  
  楼主目的蛋白做出来了没有？你买的抗体说明书上BDNF的分子量是多少？

• finger (2013-5-18 17:56:14)

  QUOTE:

  原帖由 vivian4123 于 2013-5-18 17:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  楼主目的蛋白做出来了没有？你买的抗体说明书上BDNF的分子量是多少？

  看上面
  分子量14 我用的是多克隆抗体 bdnf前体 多聚体都能显出来 所以还有28 32 两个分子量的条带

• vivian4123 (2013-5-18 17:56:43)

  但是发挥生理功能的是成熟的BDNF，即mBDNF，分子量28KD，我用abcam的多克隆抗体，做出来也是在28KD的位置，条带有点细，不过就目前查阅的国内外文献来看，差不多都是这样。前体是14KD，我看到园子里有人做过。

• finger (2013-5-18 17:58:00)

  ~~~~~~~~~~~~~~~~

  
  70343605.snap.jpg

• lgm (2013-5-18 17:58:54)

  
  请教楼主，你用的抗体浓度是多少？

• wood533 (2013-5-18 18:10:31)

  
  大家好，我最近也在做BDNF，一直弄不懂BDNF到底多大，我的942bp，蛋白大小应该是24.7KD吧？怎么好多人说是14KD呢？多谢回答

• wood533 (2013-5-18 18:10:48)

  是742bp，刚发错了，不好意思。。。

• zsxan1990 (2013-5-18 18:15:06)

  楼主的标本是细胞还是动物组织，我也刚好在做BDNF，标本是豚鼠的脑组织，买的是abcam公司的产品。不过貌似没有出现你说的这种情况。你的一、二抗稀释比例如何，哪个公司的产品？条带是多少？
  
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  你做出来没有，可否分享一下条件？我用的也是abcam抗体，做的脊髓组织，但是一直没有条带，不知道怎么回事

• 89tongzijun (2013-5-18 18:15:32)

  
  bdnf电泳条件 mark