【求助】上样缓冲液的问题

最新回复

• BUK (2013-5-21 13:23:21)

  
  不管是5倍的还是2倍的，只要终浓度的上样缓冲液是1倍的就行了！如果你觉得上样时候有点飘，可以稍微的加大点上样缓冲液的终浓度。造成飘的主要原因可能是你因为上样缓冲液比较粘稠，吸取的时候体积可能不是很准，所以吸取的时候一定要慢！

• glass (2013-5-21 13:23:51)

  未用到的孔加上缓，其实是为了保证跑出来的条带在一条线上，图看起来漂亮些而已，其实不用关系也不大，我就没用过，跑出来的图也挺好的。至于你说的，上缓的比例问题，举个例子来说，你就会明白了。如果你配的是5×的上缓，蛋白与上缓的比例就是4:1，以10ul总体积来说，就是8ul蛋白+2ul上缓；如果你配的是2×的上缓，蛋白与上缓的比例就是1:1,10ul总体系的话，即5ul蛋白+5ul上缓；如果你配的是6×的上缓，蛋白与上缓的比例就是5:1，以9.6ul总体积来说，就是8ul蛋白+1.6ul上缓。通过举得这个例子，不知带你明白这个比例了没。

• dream2013 (2013-5-21 13:24:32)

  “如果你配的是5×的上缓，蛋白与上缓的比例就是4:1，以10ul总体积来说，就是8ul蛋白+2ul上缓；如果你配的是2×的上缓，蛋白与上缓的比例就是1:1,10ul总体系的话，即5ul蛋白+5ul上缓；如果你配的是6×的上缓，蛋白与上缓的比例就是5:1，以9.6ul总体积来说，就是8ul蛋白+1.6ul上缓。”
  
  那就是说加几倍的上样缓冲液其实是没什么关系的？加几倍的都行，只是加的体积不一样而已？
  还有如果加到样品中得是5倍的，那跑胶的时候未用到的孔是加1倍的还是5倍的呢？

• moonlight45 (2013-5-21 13:25:08)

  楼上两位举得这个例子表达的意思就是“不管是5倍的还是2倍的，只要终浓度的上样缓冲液是1倍的就行了！”
  至于空的泳道，加几倍浓度的上缓其实都没有关系的，空的泳道里有上缓就是为了防止样本泳道里的液体溢到空的泳道，一般也不会溢进去的。

• fox_79 (2013-5-21 13:25:29)

  
  对呀，不管加几倍的上样缓冲液，只要最终把上样缓冲液稀释到1×的就可以了。
  给没有蛋白的孔加上样缓冲液只是为了起到一个平衡的作用，让蛋白跑齐，比如有10个上样孔，你的marker跟蛋白加在了3、4、5、6、7道，这样左边空出的1、2道，与右边空出的8、9、10道不太平衡，就可以在第8道加上上样缓冲液，不过我们都是加废蛋白的。

• yueban-1147 (2013-5-21 13:26:07)

  只要保证最后浓度是1就行，要是用的5倍的，就按蛋白：上缓（1：4）加就行。

• nn255 (2013-5-21 13:26:31)

  
  同问：
  看了前面各位的讲解我理解了很多
  但是还有不理解的地方：不管是5倍的还是2倍的，只要终浓度的上样缓冲液是1倍的就行了！
  具体什么是终浓度，为什么前面是5倍后面就成1倍了？
  谢谢，希望有人回答。

• dream2013 (2013-5-21 13:26:58)

  
  终浓度就是指即将加入胶孔的样品的上样缓冲液的浓度，前面5倍指的是自己配好的上样缓冲液的浓度，最后变成1倍就是指样品中上样缓冲液的浓度，不知道这样解释你明白了没有？

• bling (2013-5-21 13:27:24)

  蛋白上样缓冲液的作用是什么，如果不加而直接上样会怎么样?
  谢谢回答！

• H2O (2013-5-21 13:27:58)

  QUOTE:

  原帖由 bling 于 2013-5-21 13:27 发表
  蛋白上样缓冲液的作用是什么，如果不加而直接上样会怎么样?
  谢谢回答！

  直接加的话样会飘出来，因为比重比电泳缓冲液小