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【求助】双向电泳蛋白转移二向的问题
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先上图：
上面那个是胶条，胶条一起考染脱色的，明显胶条上有很多蛋白残留，蛋白没进二向胶。与一个现象，在胶条左端（+）有一小段基本没有蛋白残留，对应的下方有一小片蛋白点密集的区域。
不知道为什么蛋白残留到胶条上了，双向条件：
一向：30V 主动水化，再100，500，1000，5000，逐步升到8000V，最后聚焦到48000VH
各平衡15 min
二向：转胶条，琼脂糖封胶，1W 1h，15W 溴酚蓝到底，12.5%的胶
Blue silver染色
[ 本帖最后由 米西11米西 于 2013-5-21 15:26 编辑 ]
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89014768.snap.jpg
最新回复
ero11 (2013-5-21 15:26:40)
米西11米西 (2013-5-21 15:28:58)
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没有解决呀，跑完染了胶条，酸性端还好，碱性端能明显看到有很多点没跑下去，我师兄说碱性端是会有蛋白残留跑不下去的，但我的胶一直点都不多，我觉得就是残留到胶条里了。欢迎讨论！
ukonptp (2013-5-21 15:29:25)
注意平衡液中的SDS浓度，最好重新配平衡液。另外，平衡时，注意胶条完全浸在溶液中。试一下，有好结果来汇报！
米西11米西 (2013-5-21 15:30:22)
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恩，好的，谢谢，我这次把DTT也换了，SDS也换一个可好的药品，这次必成，哈哈
mimili_901 (2013-5-21 15:37:27)
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胶条太轻，飘在溶液上，怎么办，24cm 一条用多少平衡液呢？求指导！
mimili_901 (2013-5-21 15:37:44)
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我的是酸性段没进去，你觉得是一样的问题吗？
米西11米西 (2013-5-21 15:39:21)
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胶条飘在平衡液上？将胶条的胶面朝上平放在平衡管中，要在摇床上平衡呀，摇15 min，24 cm的胶条，我一般加10 mL平衡液就够了，可以充分覆盖胶面就行了
米西11米西 (2013-5-21 15:39:43)
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酸性端没进去？碱性端基本都进去了哇？我也不知道是不是同样的问题.....还是试试平衡的时候尽量覆盖胶条吧。我也还在试
米西11米西 (2013-5-21 15:40:18)
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你说的是平衡管？不是一般用平衡槽的吗？你用的是这个吗？我做的都是胶面向下，一根胶条加4ml,是不是有点少。
63163398.jpg
米西11米西 (2013-5-21 15:42:02)
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平衡槽？没听过，你用的伯乐的还是GE的？我用的是GE的，平衡管，那你这个平衡槽在摇床上摇不？平衡液没过胶条就行。你胶面向下？你这个情况有点像我上第一向的样品，样品加在槽里，然后胶面朝下盖住样品。可以加***：91087626，里面都是跑双向的，可以多交流哈
8s5g (2013-5-21 15:43:54)
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我用的是伯乐的，和水化的过程差不多。
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