【求助】帮我看看这个图问题出在哪

最新回复

• jujuba (2013-5-24 16:47:54)

  上样量太大。建议降低一半

• luoliqiong (2013-5-24 16:51:13)

  上样量太大、胶孔会因为电泳过程产生的热量变大、样本会向两边扩散压扁、过多则导致链接到一起、内参的上样量在10ug-20ug 也是可以做出好条带来的。

• bs4665 (2013-5-24 16:51:34)

  图太小，看不清。marker 呢？

• ii077345 (2013-5-24 16:52:13)

  上样量太大、胶孔会因为电泳过程产生的热量变大、样本会向两边扩散压扁、过多则导致链接到一起、内参的上样量在10ug-20ug 也是可以做出好条带来的。
  
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  是因为上样量大导致的胶孔过热变形么？还是上样量大和电泳过称中温度变高这两个原因都会引起样本向两边扩散？我的目标蛋白含量比较小，上样量小总是不出。加大样本量就连起来了~~~这个问题已经困扰我很久了，我上到50的时候它也会向两边扩散，当然不会这么严重~~~电泳的时候需要低温环境么？

• ii077345 (2013-5-24 16:52:32)

  上样量太大。建议降低一半
  
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  可是如果目标蛋白含量小的时候怎么办呢？我见过别人上这么大的时候也没有我的扩散的那么厉害~~~还会有其它的原因不？你遇到过这种情况么？

• ii077345 (2013-5-24 16:52:51)

  图太小，看不清。marker 呢？
  
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  这个软件还没有完全掌握，现在还不会导出大图~~~~marker是左边的亮点，不是荧光的marker,所以不太明显

• Ao7 (2013-5-24 16:53:15)

  建议低电压跑电泳，可以尝试低温环境。上样的蛋白总量100ug做表达比较少的目的蛋白还是不算多的，但上样量要注意控制在20ul以内

• ii077345 (2013-5-24 16:53:45)

  建议低电压跑电泳，可以尝试低温环境。上样的蛋白总量100ug做表达比较少的目的蛋白还是不算多的，但上样量要注意控制在20ul以内
  
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  我样本浓度10ug/ul，一般都在10ul以内。在四度环境下也试了试，感觉差别不是很大。总是上样量稍大就内参连起来了，上样量小目标蛋白就不出，郁闷。

• veiwu (2013-5-24 16:54:27)

  
  可以分两块板跑啊，跑内参的时候用50ug，而跑目的蛋白100ug啊！

• ii077345 (2013-5-24 16:55:03)

  QUOTE:

  原帖由 veiwu 于 2013-5-24 16:54 发表
  
  可以分两块板跑啊，跑内参的时候用50ug，而跑目的蛋白100ug啊！

  不是说需要在一板胶上跑，然后用目标蛋白量除以内参量的结果做统计的么？分开跑的话是只用目标蛋白量统计么？

• greenbee (2013-5-24 16:55:28)

  分开当然可以啦，像一些蛋白目的条带和内参很近，跑一快胶分不开，只能分开跑的呀，分开也可以用目的蛋白除以内参量的啊，当然样本少的话也可以放一块胶上，上样量不一样，也可以跑得，但是容易跑歪。

• 079777chao (2013-5-24 16:56:10)

  不是说需要在一板胶上跑，然后用目标蛋白量除以内参量的结果做统计的么？分开跑的话是只用目标蛋白量统计么？
  
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  做分析的时候可以把蛋白胶条分别框起来分析的，没必要都在一块胶上的，只要两次上样量不变就好了。不影响统计时目标蛋白灰度与内参灰度的比值。

• ii077345 (2013-5-24 16:57:02)

  分开当然可以啦，像一些蛋白目的条带和内参很近，跑一快胶分不开，只能分开跑的呀，分开也可以用目的蛋白除以内参量的啊，当然样本少的话也可以放一块胶上，上样量不一样，也可以跑得，但是容易跑歪。
  
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  好的，谢谢指点啊，我就是觉得每次的上样量不能保证完全一致，不在一板胶上跑的话，除以内参就失去了矫正的意义了。相近的分子量可以同一个膜stripping再重封