【求助】做western的困惑

最新回复

• popo520 (2013-5-30 11:49:08)

  
  卫矛不换一个内参？这种情况下 只能电泳多跑一会儿。

• INK (2013-5-30 11:50:06)

  QUOTE:

  原帖由 popo520 于 2013-5-30 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  卫矛不换一个内参？这种情况下 只能电泳多跑一会儿。

  老板要求就让用这个内参，没办法呀！

• PCR (2013-5-30 11:50:48)

  
  和老板说明情况 那他给你想办法 或者你换浓度高一点的胶 多跑一段时间 但是剪膜时还是存在风险的 实在不行 你就敷两次膜吧 曝光两次

• kulee (2013-5-30 11:51:39)

  建议可以把膜孵育两次，敷第一种抗体显影之后，用stripping buffer洗去抗体，再敷第二种抗体。当然两种抗体最好来源不要相同，不然不太好区分。

• mamamiya (2013-5-30 11:52:12)

  能不能用tubulin，不行的话只能stripping或者上一样的样跑两块胶了。

• zranqi_1 (2013-5-30 11:52:30)

  
  这个简单，把目的抗体和内参抗体混一块儿孵育就行了，会一块出2条带，标准的内参。

• zranqi_1 (2013-5-30 11:54:07)

  结果很稳定。就是要求这两种抗体是同一来源的，比如都是老鼠来源或都是兔子来源的。

• INK (2013-5-30 11:54:41)

  QUOTE:

  原帖由 zranqi_1 于 2013-5-30 11:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  结果很稳定。就是要求这两种抗体是同一来源的，比如都是老鼠来源或都是兔子来源的。

  我现在是同一张膜先孵育目的，曝光后重新封闭，再孵育内参，内参挺好的，不受影响。而且2种抗体是同一来源的。

• zranqi_1 (2013-5-30 12:23:48)

  
  应该第一次抗体的那个条带也会显示吧？其实是一样的

• yonger (2013-5-30 14:54:54)

  
  如果你的目的蛋白信号很弱的话，孵育第二种一抗过夜就已经洗得差不多了
  
  对定量要求较高的WB可以这样操作：内参换一种来源，先孵育对应一种抗体的二抗，显色后用H2O2或者NaOH灭活HRP，洗净后重新上另一种二抗。这样不用洗脱还没有干扰。

• ero11 (2013-5-30 14:56:36)

  如果你的目的蛋白信号很弱的话，孵育第二种一抗过夜就已经洗得差不多了
  
  对定量要求较高的WB可以这样操作：内参换一种来源，先孵育对应一种抗体的二抗，显色后用H2O2或者NaOH灭活HRP，洗净后重新上另一种二抗。这样不用洗脱还没有干扰。
  
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  还能这样？！ western blot 真是方法无穷尽