【求助】凝胶过滤分离已知大小的蛋白

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-5-30 15:10 作者: ii077345 来源: 分析测试百科网

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【求助】凝胶过滤分离已知大小的蛋白

我现在想要在牛奶中分离出来一个大小在150KD左右的蛋白,与其他的蛋白大小差距还是蛮大的,请问有什么好方法吗?我想用凝胶过滤的方法,但不知道用什么公司的,什么类型的,现在网上找资料好难啊,求帮助.

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最新回复

any333 (2013-5-30 15:11:02)

凝胶过滤分辨率不够，牛奶蛋白质分离一般要用超速离心
BOSS2011 (2013-5-30 15:11:38)

只用分子筛是很难达到很好的分离效果
还要结合其他的方法（如楼上朋友说的或是其他的色谱柱）
any333 (2013-5-30 15:12:18)

牛奶的问题在于含脂肪微粒和大量水溶性不佳的蛋白，严重影响色谱分离。少量分析可以用表面活性剂但是成本很高，一般来说实验室分离超速离心是最合适的。
ii077345 (2013-5-30 15:42:07)

牛奶的问题在于含脂肪微粒和大量水溶性不佳的蛋白，严重影响色谱分离。少量分析可以用表面活性剂但是成本很高，一般来说实验室分离超速离心是最合适的。

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嗯，我已经去过脂质和酪蛋白了。
ii077345 (2013-5-30 15:42:38)

色谱的话相差４０ＫＤ能分开吗，凝胶层析的那种。
Ao7 (2013-5-30 15:43:29)

色谱的话相差４０ＫＤ能分开吗，凝胶层析的那种。

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不行，两者分子量差一倍也只能勉强看到两个峰，谈不上分干净。
ii077345 (2013-5-30 15:44:07)

QUOTE:
原帖由 Ao7 于 2013-5-30 15:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
色谱的话相差４０ＫＤ能分开吗，凝胶层析的那种。

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不行，两者分子量差一倍也只能勉强看到两个峰，谈不上分干净。 ...
噢，知道了，谢谢啊．那有什么方法能把那个蛋白弄出来呢？我是指量比较大的，比如１克里分出个０.０１克．求帮忙啊，大侠．
Ao7 (2013-5-30 15:44:39)

QUOTE:
原帖由 ii077345 于 2013-5-30 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

噢，知道了，谢谢啊．那有什么方法能把那个蛋白弄出来呢？我是指量比较大的，比如１克里分出个０.０１克．求帮忙啊，大侠．
最简单的方法是盐析--->疏水层析, 这一步之后跑个胶看看杂蛋白在哪里, 和目标蛋白大小接近的话离子交换, 和目标蛋白差两倍以上的话凝胶过滤
yueban-1147 (2013-5-30 15:49:09)

可以尝试下膜过滤