【求助】抗体选择

最新回复

• kulee (2013-5-30 16:01:53)

  想做人sirt7的western blot和免疫组化，希望各位大侠能给推荐一个比较好的抗体！谢谢了
  
  ===========
  
  检测种属呢

• 911 (2013-5-30 16:02:24)

  我现在买的是santa的抗体。还想麻烦fangweibin119老师给指点下，我做P300快一个月了，但是就是做不出来P300，分子量300Kd。电泳条带还行，转膜能把marker转过去，但是样本蛋白全转不过去（丽春红染色，没条带，我取得是
  ）
  电泳条件如下1、电泳：浓缩胶3.5%，分离胶6% 80V 30分钟，120V跑到300KD的marker到分离胶中间的位置 ；
  转膜液：1、0.2%的SDS转膜液 （配方 Tris 5g, Gly 14.4g，SDS 20g + 20%甲醇 / L ）
  试过以下几种转膜条件：1、 300mA 6h、80h 2、 400mA 3h 转膜后丽春红都染不上色，显影后多没条带。
  也用过别人的用过可以的蛋白但是还是一样，没结果！
  特就转膜条件请予指点！

• 911 (2013-5-30 16:02:59)

  最近半个月每天都是夜里3点多睡，没结果，心里好难受

• wmp1234 (2013-5-30 16:03:43)

  
  转膜缓冲液sds的重量算错了。

• 911 (2013-5-30 16:04:22)

  
  不好意思上面的打错了，转膜液配方是 Tris 3.0g Gly 14.4g ,SDS 2g

• qianqin1977 (2013-5-30 16:04:42)

  loading能现出来吗？不能的话，换一个转膜缓冲液配方试一试。

• 911 (2013-5-30 16:05:01)

  不明白你所说的loading能出现吗，是什么意思？能解释下吗，多谢多谢！

• qianqin1977 (2013-5-30 16:05:32)

  QUOTE:

  原帖由 911 于 2013-5-30 16:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不明白你所说的loading能出现吗，是什么意思？能解释下吗，多谢多谢！

  内参能显出来吗？

• 911 (2013-5-30 16:06:22)

  我做的事普通的胶，不是梯度胶，所以当300Kd的marker跑到适当位置时，可用的最小蛋白位置在50kd以上，就没做内参。。我现在准备买梯度胶再试试，谢谢楼上的耐心指点！

• 911 (2013-5-30 16:06:47)

  这是我实验的图片，麻烦看一下：图片（1）为胶考染 中间是转膜前 两边为转膜后 ；
  
  （2）丽春红染色的结果：多张膜均看不到红色的蛋白条带
  
  请给与指点！（先在等梯度胶，做内参）

• 911 (2013-5-30 16:07:07)

  
  3、为显影胶片： 第一个是所有做的里面相对较好的，其他的如第二张几乎完全显不到条带.
  一抗santa的，推荐浓度1/200 ( 1/100_1/1000) 上面用的是1/250，室温4小时 ；二抗1/4000 ,推荐浓度 1/8000-1/10000 ,室温两小时 .