【求助】western blot转膜是，两侧的滤纸能直接接触吗？

最新回复

• pengke1983 (2013-6-03 17:41:40)

  
  可以吧，在没有覆盖住胶和膜的部分不就是直接接触的么，我都有成功过，你应该找找其他的原因

• nvdabing (2013-6-03 17:42:00)

  
  不能直接接触，因为直接接触后两侧滤纸会形成短路。下次在转膜时，下层的滤纸大一点都没问题，你把上层的滤纸裁小一点，比NC膜小一点都无妨。以后一定要注意哦。还有转移液最多只能重复三次，不要老重复使用。如果你的分子量很小，你怕转过了可以放两张NC膜，或是缩短时间，调低电流。

• 12xunmei (2013-6-03 17:42:21)

  一楼威武 这都能成功 难以置信！正如二楼所说 不能直接接触的， 根据我们的经验 我给你个更易操作且保证不短路的建议：你转膜的胶有多大 两张滤纸就裁多大， 关键在膜 膜务必要比胶和滤纸大一点（大一个上样孔的距离即可），膜看起来就像“sandwich”的夹心！

• 8s5g (2013-6-03 17:42:52)

  一楼威武 这都能成功 难以置信！正如二楼所说 不能直接接触的， 根据我们的经验 我给你个更易操作且保证不短路的建议：你转膜的胶有多大 两张滤纸就裁多大， 关键在膜 膜务必要比胶和滤纸大一点（大一个上样孔的距离即可），膜看起来就像“sandwich”的夹心！
  
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  湿转还真的无所谓，滤纸本来就泡在缓冲夜里，起作用的是两块金属板之间的电场
  
  半干转或干转才需要注意

• Ao7 (2013-6-03 17:43:18)

  我看实验室里面大家都是滤纸大于膜和胶，肯定是直接接触上了，而且做的结果也不错。

• tuuu2 (2013-6-03 17:43:37)

  
  与滤纸没关系，没转上有以下原因：
  1，电极是否插反，一般是黑胶白膜，红对红，黑对黑（转过的都明白）；
  2，如果是PVDF膜，转之前须将膜用纯甲醇侵泡5分钟左右。
  你仔细做个对照试验找下具体原因。

• newway (2013-6-03 17:47:20)

  western blot转膜是，两侧的滤纸能直接接触吗？我裁的滤纸比胶大，导致两侧滤纸直接接触了，这会导致转膜不成功吗？我最近的转膜都不成功，不知道是不是这个原因？请教高手，谢谢~~~
  
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  我也做，我用的膜都比滤纸小，这样两头的滤纸可能就会相接触，但是通常转膜都成功了。。。

• tangxin_80 (2013-6-03 17:47:53)

  一楼威武 这都能成功 难以置信！正如二楼所说 不能直接接触的， 根据我们的经验 我给你个更易操作且保证不短路的建议：你转膜的胶有多大 两张滤纸就裁多大， 关键在膜 膜务必要比胶和滤纸大一点（大一个上样孔的距离即可），膜看起来就像“sandwich”的夹心！
  
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  我们实验室用湿转，滤纸永远都比膜和胶大，没问题。

• windy+++ (2013-6-03 17:48:20)

  最近做了一阵WESTERN，湿转的话确实没关系，希望你已经找到别的原因 了...呵呵

• abc816 (2013-6-03 17:49:33)

  
  我做了很多次，滤纸很大，直接接触了都没问题，湿转