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HPLC流动相溶剂的选择和缓冲液的配制-之选择
HPLC流动相溶剂选择的一般原则:HPLC流动相溶剂的选择和缓冲液的配制-之选择
1. 溶剂要与使用的检测器匹配对UV-Vis,主要考虑本底吸收,下面是常用溶剂在不同波长下的吸收值: 200 205 210 215 220 230 240 250
乙腈 0.05 0.03 0.02 0.01 0.01 <0.01
甲醇 2.06 1.00 0.53 0.37 0.24 0.11 0.05 0.02
THF 2.44 2.57 2.31 1.80 1.54 0.94 0.42 0.21
醋酸1% 2.61 2.63 2.61 2.43 2.17 0.87 0.14 0.01
磷酸0.1% <0.01
三氟乙酸 1.20 0.78 0.54 0.34 0.20 0.06 <0.01
三乙胺1% 2.33 2.42 2.50 2.45 2.37 1.96 0.50 0.12
研究表明,当流动相的A>0.7的时候,基线噪声会显著增加,一般选择的吸收值<0.5。当A>1.0时,基本就不能用使了。对于示差折光检测器,主要考虑样品和流动相的折光率,这里不再赘述。
2. 选用的溶剂粘度要低、沸点适中使用低粘度溶剂,可减小容质的传质阻力,降低柱压,利于提高柱效。从分离制备和色质连用考虑,沸点要适中,低沸点的溶剂有它的优点;但仅仅用于分析,沸点太低,反而由于溶剂的挥发,造成保留时间的变化。
3. 尽量不用高毒性的溶剂不只是环境,单从我们自身的安全考虑,当然用低毒溶剂最好。
4. 溶剂对样品有足够的溶解力样品如果不能溶解在选用的溶剂里,还怎么分析?不屑多解释。但如果样品在流动相里溶剂仍然不大,可以用样品的最佳溶剂先溶解,再用流动相稀释,就可以了。
知道了上面选择溶剂的一般原则,就不难理解为什么不同乙醇、丙醇做流动相的原因了,因为它们的粘度大。
还有丙酮,虽然粘度和毒性较低、溶解度大、极性适中,但用于它的截至吸收波长为330nm,所以不常用,如果样品的吸收大于330nm,其实用丙酮是一个不错的选择。
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