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【求助】为什么蛋白要沉淀？
【求助】为什么蛋白要沉淀？
本人在做蛋白纯化的过程中，将纯化好的蛋白水溶液保存在-20度解冻后就出现蛋白沉淀，而在4度的蛋白就不会沉淀，为什么？？？难道是蛋白变性了吗？请问蛋白水溶液，低温是不是要变性。
另外我在做蛋白透析的时候也出现过沉淀，百思不得其解，何也？如何防之？我知道蛋白超滤是会出现变性的情况。
各位大虾是否出现过如此情况，怎样预防？？
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【求助】为什么蛋白要沉淀？
【求助】为什么蛋白要沉淀？
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-6-05 15:04 作者: qiangren789 来源: 分析测试百科网
最新回复
birdfish (2013-6-05 15:04:53)
QUOTE:
1。蛋白在低温保存是不会变性的，但蛋白溶液反复冻融很溶液使其变性，大分子断裂。所以你的样品于-20度解冻后就出现蛋白沉淀是有可能的。
2，透析过程中出现沉淀很正常，因为在这过程，你溶解蛋白的buffer发生了变法，一些有利于蛋白溶解的去垢剂被透析出去，所以蛋白可能聚集产生沉淀，另外在透析过程中，因为温度等原因，的蛋白也可能变性而产生沉淀。
yes4 (2013-6-05 15:05:22)
QUOTE:
蛋白质水溶液，低温是不会变性的。由于有些蛋白质在一定的去垢剂和一定的盐浓度下溶解较好，透析的时候，盐和去垢剂被透析掉，因此有些疏水性强的蛋白质会重新沉淀下来。
yueban-1147 (2013-6-05 15:08:02)
QUOTE:
低温的蛋白是不会变性的，如果象你说的这样，那这个蛋白不能冷冻干燥了，变性不变性得用活性去检测，我的理解是在低温的情况下，首先是水先结冰，这样蛋白的浓度越来越高，最后沉淀下来了，而解冻的时候由于已经是沉淀要溶解需要能量，这需要时间和一些温度，包括震荡，才能溶解，如果直接静置应该就是沉淀，当然另外有可能蛋白浓度比较高，因为上面说的原因而有沉淀，所以我觉得可以震荡恢复温度到室温能不能溶解。如果确实不能溶解，那有可能是变性了。透析出现沉淀是蛋白溶解需要一定的缓冲体系或者要有些盐，如果没有这样的环境那就会沉淀，解决的办法是降低蛋白浓度，或者透析的时候用缓冲液而不是水，或者缓冲液加盐。当然也要注意有的蛋白不稳定，那最好在4度左右透析。
u234 (2013-6-05 15:08:38)
我的概念是你的蛋白如果是原核表达的话，可能没复性好，要不然就不是天然蛋白。你的蛋白冻存以后沉淀，你应该考虑其他冻存方式，或者过滤除菌后4度保存，一年半载应该不会有问题的。
gemei0115 (2013-6-05 15:10:51)
如果想保存的话，我想可以用50%甘油与蛋白样品等体积保存，这样既可以避免变性，同样可以不用重新溶解，因为甘油与样品的混合液在-20摄氏度下不会冻结。
flower-201 (2013-6-05 15:12:36)
如果想保存的话，我想可以用50%甘油与蛋白样品等体积保存，这样既可以避免变性，同样可以不用重新溶解，因为甘油与样品的混合液在-20摄氏度下不会冻结。
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请问 ，这样做会不会引入甘油而影响后期试验呢？
甘油如和除去呢？
tangxin_80 (2013-6-05 15:12:54)
yychen (2013-6-05 15:13:37)
【求助】为什么蛋白要沉淀？