【求助】组织蛋白提取步骤

最新回复

• daod (2013-6-08 09:17:04)

  
  上样的时候的时候，样品很粘稠，跑胶可以看到加样孔有油油的东西，不知道是不是肝组织含多的脂类的原因，

• daod (2013-6-08 09:18:06)

  
  可不可以不煮沸直接上样啊？

• daod (2013-6-08 09:23:37)

  
  知道了，由于组织蛋白浓度太高所以一煮变成固态，就像蛋清煮后变成固态一样，要稀释后再变性，不煮直接上样应该可以，还没实验过

• vera+ (2013-6-08 09:23:58)

  
  我也遇到类似情况了，呵呵 一煮就成白色固体了。园子里大虾告诉我用loading buffer或者裂解液稀释才行。
  不过应该还是要煮的以使蛋白变性。

• daod (2013-6-08 09:24:18)

  
  用PBS稀释不行吗？

• redbutterfly (2013-6-08 09:25:20)

  粘粘的还有可能是释放出来的DNA，用超声稍微超一下看看。这样应该会好很多地。

• caihong (2013-6-08 09:26:18)

  
  超声可以把DNA超断，这样好上样。

• pengke1983 (2013-6-08 09:26:36)

  
  我也碰到类似情况了，反复实验过，有时候会凝固有时没事。现在一般都不煮了，我做的蛋白是没有问题的。实验室的一位老师说某些蛋白必须要煮，但是还有一些是一定不能煮的，老师说这个是经验问题。

• langlang (2013-6-08 09:26:58)

  
  要不要做蛋白定量？

• daod (2013-6-08 09:27:17)

  
  要的，以前没测，以为有ACTIN就不用测，后来一测还真是惊人，蛋白浓度很高
  是要测得，每个孔的上样要一致（质量），根据测定的蛋白浓度，稀释样品，决定上样量。

• www.1 (2013-6-08 09:27:39)

  
  我的肝脏组织蛋白也是一煮就变成白色胶冻状固体了，不知道怎么弄，哪位大侠指导一下啊。感激不尽！